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本文利用反转录PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR)技术,对多次动物传代和致血管内皮细胞病变的猪瘟病毒石门株E2 基因的核苷酸序列进行了测定,并与标准石门株的核苷酸及氨基酸序列的同源性进行比较及分析,以期了解猪瘟主要保护性抗原E2基因的变异情况,为猪瘟的防制提供分子流行病学方面的资料。同时用猪瘟病毒石门株脾毒接种分离培养的猪脐静脉血管内皮细胞,在引起细胞病变后,用Northern杂交技术对病变细胞中有无病毒DI 颗粒的存在进行检测,对猪瘟病毒石门株致猪血管内皮细胞病变的机制进行探讨。主要试验和结果如下: (1)采用RT-PCR 和nPCR技术扩增出经猪体多次传代猪瘟病毒石门株脾毒E2 基因,将其克隆于pMD18-T 载体并进行核苷酸序列测定,用DNA star 软件比较分析脾毒E2基因与标准石门株的核苷酸和氨基酸序列的同源性。结果发现, 脾毒和标准石门株的核苷酸序列同源性为99.4%,氨基酸序列同源性为99.0%,通过对主要抗原区域氨基酸位点变异进行分析,发现E2 基因抗原决定簇未发生明显的变异。(2)用猪瘟脾毒接种猪血管内皮细胞,对引起细胞病变的细胞毒E2 基因进行克隆测序,比较分析细胞毒E2 基因与标准石门株的核苷酸和氨基酸序列的同源性。结果发现, 细胞毒标准石门株的核苷酸序列同源性为98.3%,氨基酸同源性为96.7%,通过对主要抗原区域氨基酸位点变异进行分析,发现E2 基因的变异也比较小,但发现细胞毒E2基因较多次传代脾毒的变异大,说明猪瘟病毒在猪体比组织培养的遗传稳定性高。(3)根据资料,设计引物扩增出猪瘟病毒p80 基因,用地高辛随机引物标记和检测试剂盒标记该扩增产物,以此作为探针;用猪瘟脾毒接种猪血管内皮细胞,在引起细胞病变的36h、54h、72h 提取细胞总RNA,用甲醛变性凝胶电泳对总RNA 进行分离,再转至尼龙膜,用标记的探针进行Northern 杂交。结果显示,在病变的内皮细胞总RNA中没有缺失的基因组存在,所以可以推论出CSFV 石门株感染猪血管内皮细胞后在短时间的致细胞病变过程中并无DI 颗粒的产生。