肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor associated factor,TRAFs)是一类细胞内具有内信号转导功能的蛋白。这类分子能介导RLR、TLR、NLR和TNF家族信号通路,最终激活NF-κB、JNK和MAPK等参与机体先天性和获得性免疫应答。TRAFs在哺乳动物中的研究已经取得较大的进展,涉及信号通路和疾病治疗,而TRAFs在鱼类中的研究还极其匮乏。本研究以斜带石斑鱼为模型,克隆了TRAFs家族的7个基因,检测了这些基因在健康石斑鱼组织以及刺激隐核虫感染后鳃和脾脏中的表达,最后研究了其信号转导功能,具体实验结果如下:(1)基于实验室已获得的斜带石斑鱼转录组数据,获得了7个TRAFs同源基因,分别命名为EcTRAF2-1、EcTRAF2-2、EcTRAF2-3、EcTRAF3、EcTRAF4、EcTRAF5和EcTRAF7,ORF分别为1563bp、1356bp、1797bp、1767bp、1413bp、1743bp和1977bp,分别编码520、451、598、588、470、580和658个氨基酸;同源比对和进化树分析显示这些分子与哺乳动物及硬骨鱼类相应蛋白高度同源。(2)这7个EcTRAFs基因在健康石斑鱼的14个组织中都能够表达,且在粘膜免疫相关组织中具有较高的表达量,特别是皮肤;刺激隐核虫感染后,这7个EcTRAFs基因在鳃和头肾中的表达量均上调,暗示这些基因可能参与了斜带石斑鱼抗刺激隐核虫的免疫反应。(3)细胞定位和荧光素酶报告基因实验显示:除了EcTRAF4能同时在细胞核和细胞质中表达外,其他6个EcTRAFs均只能在细胞质中表达。EcTRAF2-1、EcTRAF2-2、EcTRAF3、EcTRAF5和EcTRAF7均能激活NF-κB信号,而EcTRAF2-3和EcTRAF4对NF-κB无激活作用;当EcTRAF2-3和EcTRAF2-1或EcTRAF2-2共转染时,前者下调EcTRAF2-1和EcTRAF2-2对NF-κB的激活能力,推测EcTRAF2-3可能抑制EcTRAF2-1和EcTRAF2-2的信号转导功能;此外,我们构建了EcTRAF5不同缺失表达载体,发现RING或Zinc Finger结构域缺失会显著降低EcTRAF5对NF-κB信号的激活作用,说明这两个结构域是其行使信号转导所必须的。