肺纤维化是多种急慢性肺间质疾病的共同转归。α-黑素细胞刺激素(α-MSH)具有较强的抗炎作用,可减轻缺血再灌注损伤。内毒素(LPS)诱导的全身炎症反应以及博莱霉素(BLM)诱导的急性肺损伤,但目前尚无α-MSH预防BLM诱导的肺纤维化的研究。α-MSH类似物是在α-MSH基础上进行蛋白修饰后合成的作用更强、更持久的抗炎药物,本研究拟用α-MSH类似物来治疗BLM诱导的肺损伤,以评估其抗炎、抗纤维化的作用,并探讨可能机制。 实验一、α-MSH类似物对BLM诱导的致死性肺纤维化小鼠生存状况的影响 目的：观察α-MSH类似物对BLM诱导的致死性肺纤维化小鼠生存状况的影响。 方法:C57BL/6小鼠取40只,随机分为假手术组[NS 40μl气管内滴入+磷酸盐缓冲液(PBS)40μl腹腔注射,1/日,给药途径下同]、模型组(BLM 5mg/kg+PBS液40μl)、低剂量α-MSH类似物治疗组(BLM 5mg/kg+α-MSH类似物1.25mg/kg)和高剂量α-MSH类似物治疗组(BLM 5mg/kg+α-MSH类似物2.5mg/kg),每组10只。观察14日各组小鼠生存状况。 结果：α-MSH类似物治疗可有效减轻BLM诱导的症状和体征如发绀、呼吸急促、活动量减少等,显著提高小鼠14日观察期的生存率,延长小鼠的平均生存时间,且存在一定的量效关系。 实验二、α-MSH类似物对BLM诱导的非致死肺纤维化小鼠的治疗作用 目的：本研究观察α-MSH类似物对BLM诱导的非致死肺纤维化小鼠的治疗效果,以评估其抗炎、抗纤维化的作用,并探讨可能机制。 方法:C57BL/6小鼠取108只,随机分为假手术组(NS 40μl气管内滴入+PBS液40μl腹腔注射,1/日,给药途径下同)、肺纤维化模型组(BLM 3mg/kg+PBS液40μl)、低剂量α-MSH类似物治疗组(BLM 3mg/kg+α-MSH类似物0.625mg/kg)、中剂量α-MSH类似物治疗组(BLM 3mg/kg+α-MSH类似物1.25mg/kg)、高剂量α-MSH类似物治疗组(BLM3mg/kg+α-MSH类似物2.5mg/kg)、地塞米松治疗组(BLM 3mg/kg+地塞米松1mg/kg)。术后7、9和14日每组分别取6只处死,收集肺组织标本待行下列检查：①7日,行支气管肺泡灌洗,将灌洗液离心后,沉淀行Wright-Giemsa染色,干燥后油镜下行细胞计数并分类,上清液行TNF-α、转化生长因子β1(TGF-β1)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)和巨噬细胞炎性蛋白-1(MIP-1)检查；②9日,real time-PCR法检测右下肺中胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表达,检测右中上肺NO含量,免疫组化法检测左肺TGF-β1、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达；③14日,左肺行HE和Masson三色胶原染色,酸解法测定右肺羟脯氨酸含量。 结果： ①α-MSH类似物可降低BLM诱导的肺内TNF-α、MCP-1和MIP-1水平的增加,并抑制炎性细胞如中性粒细胞、肺泡巨噬细胞以及淋巴细胞趋化至肺,且呈剂量依赖性； ②α-MSH类似物可通过减轻肺内炎症反应,减少BLM引起的肺内NO合成增加,进而减轻肺内脂质过氧化作用,保护肺实质细胞功能； ③α-MSH类似物可减少TGF-β1的分泌,促进细胞外基质的清除(提高MMP-1/TIMP-1比值),从而降低肺内Ⅰ、Ⅲ型胶质蛋白合成,减少肺组织羟脯氨酸的含量。肺组织HE染色、Masson三色染色以及α-SMA免疫组化染色从病理上进一步证实α-MSH类似物具有抗肺纤维化的作用。 结论：α-MSH类似物可通过减轻炎症反应,抑制炎性细胞趋化,维护氧化/还原平衡,促进细胞外基质清除等多个相互关联的机制抑制BLM诱导的肺损伤和肺纤维化,从而改善肺纤维化小鼠的预后。