脑缺血后由于再通带来的继发性再灌注损伤,对缺血性中风的预后和治疗有重要的影响。脑缺血的病理生理是个多环节、多因素、多途径损伤的酶促级联反应,西医干预其中某一途径的治疗,临床疗效甚微。而中医学可从整体观念以及中药的复方特点出发,利用其可作用于多环节多靶点,来干预脑缺血损伤的病理过程。近年来研究表明,神经细胞内钙超载是诸多原因造成细胞损伤和死亡的共同途径;清开灵有效组分栀子苷、黄芩苷、胆酸、珍珠母等具用解毒通络、开窍醒神等功效。故本实验以缺血再灌注过程中游离钙离子变化及相关机制的研究为切入点,观察中药单体栀子苷、黄芩苷、胆酸、珍珠母及配伍抗缺血再灌注损伤的机制。论文主要分为文献综述和实验研究两个部分,文献综述包括:缺血再灌注神经元损伤与钙相关调节机制以及清开灵有效组分栀子苷、黄芩苷、胆酸、珍珠母治疗脑缺血再灌注损伤的研究概况。实验部分如下:1.研究方法实验研究选用新生24小时内SPF级别的SD大鼠,分离海马组织培养海马神经元。采用钙离子、线粒体、内质网的特异性荧光分子探针及激光共聚焦显微镜检测分析技术,观察了清开灵有效组分栀子苷、黄芩苷、胆酸、珍珠母及配伍对海马神经元细胞内钙离子、线粒体活性及内质网活性的影响。2.结果与结论2.1清开灵有效组分及配伍对缺血再灌注海马神经元钙超载的保护作用体外模拟缺血再灌注12小时,海马神经元细胞内游离钙离子明显升高,缺血缺氧再灌注模型组与对照组比较细胞内钙离子明显升高。栀子苷、黄芩苷、胆酸、珍珠母配伍药物中大小两个剂量对缺血缺氧再灌注后的神经元均有降低胞浆钙,明显减轻缺氧神经元钙超载的作用,配伍药缓解缺血缺氧后的钙超载来调节细胞功能;可初步提供清开灵有效组分配伍保护神经元的理论依据。单体实验观察到栀子苷有降低缺氧后细胞内钙离子浓度的作用,从而减轻缺血神经元的钙超载;栀子苷可能发挥了稳定受损神经元功能,降低代谢合成水平而增强神经元抵御缺氧能力的作用,黄芩苷、胆酸、珍珠母基本对缺血再灌后的海马神经元细胞内钙超载未显示其阻抑作用2.2清开灵有效组分及配伍对海马神经元线粒体活性的影响本实验结果显示加入栀子苷、黄芪苷、胆酸、珍珠母配伍药物5ul/2ml后可以升高缺血再灌注后下降的海马神经元线粒体荧光值,提高海马神经元线粒体活性,阻抑缺血再灌注对神经元的损伤。提示我们配伍药物的作用靶点之一可能是通过改善线粒体的活性来增加能量ATP的生成利用,从而改善线粒体钙库摄取胞浆钙离子的能力,通过减低钙超载来阻断延缓神经元的损伤。缺血缺氧后海马神经元线粒体活性下降,而各单组分药物组出现了不同的反应结果:黄芩苷组线粒体荧光值显著高于缺血模型组,栀子苷、珍珠母组各浓度与模型组活性相当,没有显示出保护作用;而胆酸25ug/ml组线粒体活性低于模型组,出现了加重线粒体损伤的反作用;由此我们可推出,黄芩苷的保护海马神经元缺血再灌注的作用环节有线粒体途径,黄芩苷具有的稳定损伤神经元代谢功能,可能是通过提高线粒体活性增加其钙库摄取能力及ATP生成,从而防治海马神经元缺血再灌注损伤。2.3清开灵有效组分及配伍对海马神经元内质网活性影响模拟缺血再灌注组的海马神经元内质网荧光值再灌注12小时呈明显下降,海马神经元缺血再灌注后,内质网活性明显降低。对于内质网作用环节黄芩苷、珍珠母降低内质网活性,对缺血再灌注后神经元损伤没有起到保护作用;具有加重内质网缺血再灌注后活性降低的副作用;栀子苷、胆酸没有发挥效应,可能通过其他途径发挥保护神经元的作用。本实验结果表明,加入对照液PBS和栀子苷、黄芩苷、胆酸、珍珠母配伍药液,均不能增加缺血再灌注后活性降低的海马神经元内质网荧光值,可见栀子苷、黄芩苷、胆酸、珍珠母配伍不能升高缺血再灌注后神经元损伤的内质网活性,这四种清开灵有效组分的配伍无阻抑海马神经元内质网损伤的作用,但具有平抑黄芩苷珍珠母单组分降低内质网活性的副作用。本文实验统计结果为临床如何应用清开灵有效组分单体及配伍提供了可参考的实验证据,但有效组分及配伍为何产生增效或减效的机理有待于进一步的研究探索。