祛风清热、活血通络法对人滑膜细胞增殖和凋亡的影响

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目的:确立祛风清热、活血通络法。制备含金边祛风饮的含药血清,用含药血清刺激滑膜细胞,用MTT法、流式细胞术等方法检测其含药血清对滑膜细胞起到的作用,用比色法检测不同浓度的金边祛风饮含药血清作用于滑膜细胞后对Caspase-3活性影响。进一步说明金边祛风饮治疗痹症疗效确切,为金边祛风饮在临床上应用提供可靠实验依据。方法:(1)确立金边祛风饮治疗痹症的治则治法,理论探讨祛风清热、活血通络法。(2)饲养雌性SD大鼠30只用于提取含药血清所需。(3)将30只雌性SD大鼠随机分为三组,每组分别灌服不同浓度的金边祛风饮、雷公藤及生理盐水做对照。观察SD大鼠的活动、饮食、睡眠等一般情况,后采取眼球取血,获得金边祛风饮含药血清。(4)将我院进行髋关节置换的RA患者的滑膜及OA患者的滑膜组织进行细胞培养,采用3-4代滑膜细胞实验,用不同浓度的含药血清刺激滑膜细胞,同时与灌服雷公藤组、生理盐水组进行比较。(5)用MTT法检测对滑膜细胞增殖的影响、流式细胞仪等检测对滑膜细胞周期及凋亡的影响。证实金边祛风饮含药血清能促进类风湿关节炎滑膜细胞凋亡,而对骨关节炎滑膜细胞效果略差。(6)用比色法检测不同浓度的金边祛风饮含药血清作用于滑膜细胞后对Caspase-3活性的影响,探讨诱导凋亡发生的机制及作用环节。结果:(1)MTT结果显示:不同浓度的金边祛风饮对RA滑膜成纤维细胞增殖均有抑制作用,尤以高剂量组明显(P<0.01)。RA各组抑制作用随时间、剂量的增高而逐渐增多,呈现时间及剂量的依耐性(P<0.05)。OA滑膜细胞在低剂量作用下抑制作用不明显,但随着剂量增大和时间延长,对滑膜细胞有较轻的抑制的作用(P<0.05)。(2)流式细胞仪检测显示:金边祛风饮含药血清浓度为20μl/mL,30μl/mL,40μl/mL,50μl/mL时能明显诱导滑膜成纤维细胞发生凋亡(P<0.01)。同对照组相比,金边祛风饮含药血清组的凋亡细胞明显增多,且增多有显著统计学差异(P<0.01)。用金边祛风饮诱导RA滑膜细胞凋亡作用优于诱导骨关节炎滑膜细胞凋亡。(3)金边祛风饮能使细胞周期在G0/G1期阻滞,并且具有浓度和时间依赖性。(4)比色法检测显示:随着金边祛风饮含药血清浓度的增高,各组滑膜细胞的Caspase-3活性均逐渐增强,有效作用浓度从20umol/L开始,刺激时间越长活性增高越明显。此实验结果提示Caspase-3可能参与了金边祛风饮诱导滑膜成纤维细胞凋亡的过程,其过程可能是通过Caspase-3途径。结论:金边祛风饮能抑制滑膜细胞的生长、增殖,在一定范围内与时间、剂量呈一定相关性。金边祛风饮能使细胞周期在G0/G1期阻滞,并且具有浓度和时间依赖性。金边祛风饮能诱导滑膜细胞凋亡,其相关作用机制可能与激活Caspase-3途径有关。本试验为临床治疗RA筛选用药及剂量提供参考,以更好为广大的患者服务。
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