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目的：建立分辨率高和重复性好的重症肌无力(myasthenia gravis，MG)患者及正常胸腺组织提取液量约11KD差异(异常)蛋白质的双向凝胶电泳图谱，比较二者蛋白质组，筛选并鉴定MG胸腺组织异常表达蛋白。
方法：
1.以尿素、硫脲、CHAPS、PMSF为主要成分的样品裂解液提取10例正常人和37例MG患者增生型胸腺组织蛋白质，Bradford法测定蛋白浓度，SDS-PAGE电泳筛选含有11KD差异(异常)蛋白带的MG胸腺组织，并行胶内11KD差异(异常)蛋白带的提取、纯化富集，测蛋白浓度后分装-80℃冻存。
2.以17cmpH3-10固相pH梯度胶条(immobilized pH gradiednt，IPG)做第一向IEF，12％SDS聚丙烯酰胺凝胶为第二向进行双向电泳(2-DE)，PDQuest7.1软件分析双向凝胶电泳图谱的分辩率和重复性。
3.利用PDQuest7.1软件，比较MG患者及正常胸腺组织蛋白质的双向凝胶电泳图谱，筛选异常表达蛋白，胰蛋白酶进行胶内原位酶解，经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-associated laser desorptio/ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)分析得到肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprinting，PMF)和数据。
4.登陆网站 http://www.matrixscience.com，用Mascot程序检索NCBInr数据库，鉴定蛋白质。
结果：
1.在36例MG增生型胸腺组织标本中，应用SDS-PAGE凝胶进行分离、筛选，其中27例含有11KD差异(异常)蛋白带，其出现率为75％。研究中为更利于11KD差异(异常)蛋白带的筛选，故对12％和15％浓度SDS聚丙烯酰胺凝胶进行比较，实验发现采用15％的SDS-PAGE凝胶使不同分子量蛋白带更加集中，尤其是低分子量蛋白，分界清楚，图像更加清晰，适宜于下一步11KD差异(异常)蛋白的胶内富集。
2.通过双向电泳，进一步分离了11KD差异(异常)蛋白带，建立了分辨率高和重复性好的重症肌无力(MG)增生型胸腺组织11KD差异蛋白带的双向凝胶电泳图谱，并得到30±6个蛋白点。
3.从MG增生型胸腺组织中共筛选出16个异常表达的蛋白点。
4.异常表达的蛋白点经胶内酶解-质谱指纹图分析，获得了5张肽质量指纹图谱，经数据库查询分析，即Spot4，7，16，19，30号得到鉴定，分别为similar tobarrier to autointegration factor 1；beta globin；wnnamed protein product：Chain B，Hemoglobin(Deoxy)Mutant With Val B 1 Replaced By Met，His B 2 Deleted，Val D 1 Replaced；Chain A，Solution Structure Of Rrm Domain In A18 Hnrnp。
结论：
1.通过蛋白质组技术快速建立MG增生型胸腺提取液11KD差异(异常)蛋白表达图谱，为进一步研究差异表达蛋白的功能提供实验基础。
2.经对MG患者和正常胸腺组织比较蛋白质学研究，得到5个MG特异表达蛋白，这些异常蛋白是胸腺异常的物质基础，与胸腺组织异常增生相关，但与重症肌无力的发病及发展机制尚不清楚。本研究为在此基础上研究这些蛋白质的生物学功能，进一步探讨与MG发生、发展及预后的关系以及寻找MG生物治疗的靶蛋白打下了基础。