氟乐灵与秋水仙素诱导萝卜同源四倍体及小孢子培养初步研究

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萝卜(Raphanus sativus L.)是中国一种重要蔬菜作物,种质资源丰富。多倍体育种能够提高作物产量与品质;游离小孢子培养能够在短时间内获得纯合植株,缩短育种时间。但是目前萝卜多倍体种质高效的诱导体系尚未建立,特别是采用氟乐灵诱导萝卜多倍体研究还未见报道;萝卜游离小孢子培养胚状体与再生植株频率比较低。   本研究采用秋水仙素和氟乐灵两种试剂诱导同源四倍体植株,并比较不同的倍性鉴定方法;通过小孢子培养筛选出具有成胚能力的基因型,探讨影响萝卜小孢子培养中胚状体产生的因素,以期为萝卜四倍体与单倍体植株高效诱导和种质创新提供技术支撑。萝卜四倍体诱导技术体系研究中,以本实验室保存的6个萝卜基因型为材料,用秋水仙素和氟乐灵两种药剂诱导同源四倍体植株。研究结果表明,采用生长点滴定法,以0.1%的秋水仙素处理,在6个基因型中都获得了四倍体植株,Nau-xht与Nau-zhqh诱导率最高(16.67%)。采用0.2 mmol/L和1 mmol/L氟乐灵除草剂处理,Nau-dy(1)3与Nau-xbch都获得四倍体,诱变率为40%,诱导效果比秋水仙素诱导的效果明显增加。四倍体植株气孔大小、保卫细胞内叶绿体数目、花器官大小、花粉粒纵横径都与二倍体植株存在显著差异,表现出“巨大性”。研究表明将形态学鉴定、气孔鉴定和染色体计数鉴定结合起来可以准确确定变异株的倍性。   本研究在萝卜同源四倍体种质创新与鉴定方面,采用0.1%秋水仙素滴定11个萝卜基因型幼苗生长点,均得到四倍体植株,诱导率最高为33.33%,最低为16.67%,并通过植株形态鉴定、气孔特征鉴定、花粉粒鉴定和染色体计数法鉴定出了萝卜四倍体植株。在萝卜小孢子培养研究中,以本实验室96个萝卜基因型为材料,筛选具有成胚能力的基因型,并对花蕾长度与小孢子发育时期的关系、及培养基中添加不同浓度的2,4-D,6-BA等影响游离小孢子培养的因素进行研究。研究结果表明:有7个基因型形成了胚状体,基因型是决定胚状体发生的决定因素;其中材料“09-4265”形成了再生植株;花蕾长度为3-4.5 mm时小孢子发育阶段处于单核靠边期;NLN-13培养基中添加0.2 mg/L2,4-D和0.1 mg/L的6-BA能够有效促进胚状体的形成。
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