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目的:探讨激动型CD40单克隆抗体(CD40 monoclonal antibody,CD40m Ab)体外对负载肿瘤抗原的树突状细胞(dendritic cells,DCs)激活情况,进而研究DCs诱导活化的肿瘤特异性效应T淋巴细胞对人结肠癌细胞HCT116增殖的抑制作用。方法:应用反复冻融法制备肿瘤抗原,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs),贴壁培养分离DCs前体细胞和T淋巴细胞,体外rh GM-CSF和rh IL-4联合诱导DCs前体细胞定向分化成未成熟的DCs后予肿瘤抗原负载,在不同条件下激活促进其成熟,不同实验条件分组为:空白阴性对照组、阳性对照TNF-α组和激动型CD40m Ab组,不同条件处理后应用流式细胞仪检测激活后各组DCs表面分子表达情况,ELISA检测各组细胞培养液上清中细胞因子IL-12(p70)分泌情况;进而将各组DCs分别与T淋巴细胞混合培养,诱导产生肿瘤特异性效应T淋巴细胞,MTT法检测DCs诱导T淋巴细胞分化增殖能力;将不同条件诱导产生的肿瘤特异性效应T淋巴细胞分别与结肠癌细胞HCT116混合培养,MTT法检测效应T淋巴细胞对HCT116细胞增殖的抑制作用。结果:成功制备可溶性肿瘤冻融抗原,浓度为2.01mg/ml;从PBMCs中可以分离获得DCs前体细胞和T淋巴细胞;激动型CD40m Ab激活的负载肿瘤抗原DCs表面分子CD80(92.5%±6.7%)、CD83(22.4%±5.3%)、CD86(81.3%±7.5%)和HLA-DR(87.8%±3.7%)的表达率及细胞培养液上清中IL-12(p70)分泌浓度(716.80±53.43pg/ml)明显高于空白阴性对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),与阳性对照TNF-α组相比无明显差异(P>0.05);激动型CD40m Ab组DCs诱导T淋巴细胞分化增殖后测得刺激指数(SI)为2.0062±0.4383显著高于空白阴性对照组(1.3650±0.2098),差异具有统计学意义(P<0.05),与阳性对照TNF-α组(1.9778±0.3704)相比无明显差异(P>0.05);激动型CD40m Ab激活的DCs所诱导的效应T淋巴细胞对结肠癌细胞的杀伤率为66.08%±0.41%,明显高于空白阴性对照组(46.60%±1.10%),差异具有统计学意义(P<0.05),与阳性对照TNF-α组(66.21%±1.73%)相比无明显差异(P>0.05)。结论:1、激动型CD40m Ab在体外可以更好的激活负载肿瘤抗原的DCs并促进其成熟。2、激动型CD40m Ab激活的DCs能够显著增强T淋巴细胞分化增殖活性并诱导活化肿瘤特异性效应T淋巴细胞。3、激动型CD40m Ab激活的DCs诱导活化的肿瘤特异性效应T淋巴细胞在体外对结肠癌细胞增殖具有显著的抑制作用。