分子印迹技术复性蛋白质的研究

来源 :华中师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:andrew2011
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基因工程技术的快速发展,使得蛋白质的异源表达已经成为获得蛋白质产品和提高生物产业水平的重要途径。然而,重组蛋白在宿主系统中高水平表达时,往往会聚集形成包涵体沉淀,为了获得生物活性的蛋白质,包涵体必须复性成为具有天然构象的活性蛋白质。由于蛋白质理化性质复杂且构象灵活,其复性问题已经成为现代生物工程中的技术瓶颈。蛋白质分子印迹技术是最近发展起来的一门新技术,该技术具有特异识别性、构象预定性、长期稳定性及广泛适用性等诸多优势。因此,将分子印迹技术用于蛋白质的复性研究,可以提高重组蛋白的复性效率,促进基因工程的发展。  本文以溶菌酶(lysozyme,LZM)为模板、丙烯酰胺为功能单体,采用包埋法制备了分子印迹聚合物(molecularlyimprintedpolymers,MIP),并根据模板的洗脱率优化了印迹聚合物的制备条件和模板洗脱条件。实验结果表明,制备溶菌酶印迹聚合物的最佳模板浓度为2mg/mL,最佳交联度为10%;采用1MNaCl作为洗涤剂时洗脱效率最高。再结合实验结果表明,印迹聚合物对模板蛋白具有良好的特异性和选择性吸附能力,这种识别能力主要由化学印迹效应决定,同时还和体积效应有关。  在此基础上,选用印迹效率(imprintingefficiency,IF)较高的MIP作为固定相装填印迹色谱柱,将变性后的溶菌酶蛋白和BSA分别进行柱上复性,并分别采用荧光光谱法和酶活力测定法对蛋白的复性效果进行了检测。实验结果表明,蛋白质分子印迹聚合物存在印迹效应,能够特异性复性模板蛋白,复性率达到84%。
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