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目的通过建立兔增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy, PVR)动物模型,探讨腺病毒介导p21WAF1/CIP1基因对PVR增生的抑制作用及机制,评价其治疗PVR的效果。方法1.PVR动物模型的建立：青紫蓝兔28只,随机分成两组,实验组及对照组各14只。实验组采用玻璃体腔注射人富含血小板血浆(Platelet-rich plasma,PRP)联合巩膜外冷冻建立PVR模型,对照组采用玻璃体腔注射兔PRP建立PVR模型。行间接眼底镜、B型超声及HE染色检查,观察PVR程度及视网膜脱离的发生情况。2.p21WAF1/CIP1在PVR发病机制中的作用：青紫蓝兔27只,随机分成两组,正常组3只,实验组24只。正常组不做任何处理；实验组每只兔随机选取一只眼作为实验眼,采用玻璃体腔注射人PRP联合巩膜外冷冻建立PVR模型。行蛋白免疫印迹(Western blot, WB)和逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR),检测PVR模型建立后第7d、14d、21d及28d视网膜组织中p21WAF1/CIP1、CDK2、cyclin E蛋白及mRNA的表达。3.体外实验：体外培养hRPE407细胞,细胞同步化后,分为磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution, PBS)组、阴性对照(adenovirus mediated delivery of non-target control, Ad-NC)组和腺病毒p21WAF1/CIP1载体转染(adenovirus mediated delivery of p21WAF1/CIP1, Ad-p21)组。行WB和RT-PCR检测p21WAF1/CIP1、CDK、cyclin E蛋白及mRNA在细胞中的表达；行3-甲基-2-噻唑硫酮(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT)试验、流式细胞仪及Transwell检查。4.体内实验：青紫蓝兔50只,随机分成4组,正常对照组2只,PBS组、Ad-NC组及Ad-p21组各16只。其中PBS组、Ad-NC组及Ad-p21组按照前述方法建立PVR模型。正常组不做任何处理,PBS组、Ad-NC组及Ad-p21组于建模后第7d玻璃体腔分别注入PBS、Ad-NC及Ad-p215ul。第14d时,行WB和RT-PCR检测p21WAF1/CIP1、CDK2、cyclin E蛋白及mRNA在视网膜组织中的表达。行间接眼底镜、B型超声及HE染色,观察第28d各组PVR程度及视网膜脱离的发生情况。结果1.建模后观察28d,实验组20眼均发生了视网膜脱离,发生率为100%；对照组,13眼发生了视网膜脱离,发生率为65%,两组差异有统计学意义(P<0.01)。2. WB和RT-PCR检测结果显示,PVR模型建立后7d、14d、21d及28d视网膜组织内p21WAF1/CIP蛋白及mRNA表达水平均低于正常组,第14d时表达最低(P<0.01),而CDK2、cyclin E表达均高于正常组,在第14d时表达水平最高(P<0.01)3.WB和RT-PCR检测结果显示在Ad-p21组,p21WAF1/CIP蛋白和mRNA的表达均增高,说明腺病毒成功介导p21WAF1/CIP基因转染人视网膜色素上皮细胞,并稳定表达。MTT检测细胞转染p21WAF1/CIP基因48h后其增生抑制率达到43.13%,较其它组细胞生长速度减慢。细胞周期检测结果显示,Ad-p21组处于G0/G1期的细胞所占百分比显著高于PBS及Ad-NC组(P<0.01)。Transwell小室检测结果显示Ad-p21组穿膜细胞数,明显低于PBS及Ad-NC组(P<0.01)。4.间接眼底镜及B超结果显示PBS组、Ad-NC组及Ad-p21组第28d视网膜脱离的发生率分别为100%、91.67%和33.33%。建模后第14d时,WB和RT-PCR显示Ad-p21组p21WAF1/CIP1蛋白及mRNA的表达显著高于正常组、PBS组及Ad-NC组(P<0.01),而CDK2、cyclin E表达明显低于其它组(P<0.01)。结论1.采用玻璃体腔注射人PRP联合巩膜外冷冻可成功建立了PVR动物模型,视网膜脱离的发生率为100%。2.p21WAF1/CIP1基因在PVR发病机制中可能起着重要作用。3.腺病毒介导p21WAF1/CIP1基因能有效抑制人视网膜色素上皮细胞的增生及迁移。4.腺病毒介导p21WAF1/CIP1基因可有效减轻PVR程度,并降低视网膜脱离发生率。