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目的 观察药物维甲酸(Retinoic acid,RA)对培养的人视网膜色素上皮(Retina pigment epithelium cell,RPE)细胞生长的抑制,以及对连接蛋白Cx43的表达的影响,分析维甲酸对细胞生长的抑制和细胞间缝隙连接功能、细胞间通道蛋白Cx43表达的相互关系;研制可以作为玻璃体腔内注射的可以生物降解的RA缓释系统;维甲酸和海藻酸钠制成海藻酸钠—维甲酸(alginate sodium-retinoic acid;AGS-RA)微球,研究该RA药物缓释系统对激光损伤模型中视网膜下增殖反应区形成的抑制作用。 方法 免疫组化方法观察缝隙连接蛋白(connexin43,Cx43)在培养的人RPE细胞中的表达特点;不同浓度的RA作用于培养的第4代人的RPE细胞,用MTT的方法观察RA对体外培养人RPE细胞生长的影响;用LY染料传输方法测定细胞间隙连接功能;免疫组化方法鉴别不同浓度RA影响后的缝隙连接蛋白Cx43的表达;Western blot实验测定RA影响后RPE细胞的蛋白表达量的变化;原位杂交观察Cx43mRNA在RPE细胞中的表达特点;RT—PCR对RA影响后的RPE细胞的mRNA进行半定量观察;有机溶剂将维甲酸溶解,与1.5%的海藻酸钠均匀混合,用静电微囊发生器一次成型制作海藻酸盐—维甲酸微球;紫外分光光度仪测定微球的药物含量;体外释药试验:通过紫外分光光度仪测定RA的体外释放规律;玻璃体腔注入AGS-RA药物微球及空白微球,应用电生理、电镜、光镜的方法评价微球对视网膜的毒性;利用高压液相的方法观察微球的房水药代动力学特点;建立激光损伤动物模型(激光照射时间0.20s,光斑200μm,能量输出功率分别为420mW);激光光凝后立即玻璃体内注射AGS-RA微球、空白微球或BBS对照;激光光凝后1,2,3,4,6W周分别做视网膜病理组织连续切片,每一个时间点的各组取6个激光斑,分别测量激光斑的高度、宽度和面积并进行统计学分析。 结果 免疫组化染色显示体外培养的人RPE细胞表达缝隙连接蛋白Cx43,表达的部位主要在细胞浆和细胞膜;RA对人RPE细胞的生长有明显