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前期的实验结果曾证实花粉细胞质膜上存在异三聚体G蛋白,药理学等实验证实植物异三聚体G蛋白参与了花粉萌发及花粉管伸长生长过程的调节,且细胞外钙调素可能是异三聚体G蛋白参与调控的质膜外信号之一。本论文利用异三聚体G蛋白相关突变体及其超表达转基因拟南芥为材料,对异三聚体G蛋白在拟南芥花粉萌发和花粉管生长中的作用又进行了观察。实验结果初步表明异三聚体G蛋白似乎没有参与细胞外钙调素调节的花粉萌发及花粉管生长的跨膜信号转导。
实验中,以拟南芥GPAl基因缺失突变体(gpal-l,gpal-2)及超表达Gα的转基因拟南芥(wGa,cGa)花粉为材料,研究花粉萌发及花粉管生长。结果表明:体外实验中gpal突变体花粉的萌发率低于野生型花粉,而超表达Gα花粉的萌发率高于野生型;五种不同基因型花粉的花粉管伸长生长速率没有明显差异。上述结果从分子水平上提供直接的证据证实,异三聚体G蛋白α亚基参与了拟南芥花粉萌发的调节,似乎没有参与花粉管生长的调节。
实验中用数字比率荧光测定系统测定了上述材料花粉粒细胞中游离钙离子水平的差异。结果分析表明:gpal突变体花粉粒的钙离子浓度低于野生型花粉,而超表达Ga花粉粒的钙离子浓度则高于野生型,表明了胞浆中的钙离子可能参与G蛋白调节的花粉萌发过程。
外源钙调素处理对野生型、Gα蛋白突变体gpal以及Gα转基因超表达植株的花粉萌发和花粉管生长都有促进作用,但萌发率和花粉管伸长生长速率在五种基因型之间基本上没有明显差异。表明G蛋白可能没有参与细胞外钙调素调节花粉萌发及花粉管生长的跨膜信号转导。
外源钙调素处理对野生型及GPAl基因缺失突变体和超表达中的游离钙离子水平基本没有影响,表明胞浆中的钙离子可能没有参与外源钙调素对花粉萌发和花粉管伸长生长的调节。