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目的:利用二代转录本测序技术检测胰腺癌亲代细胞系SW1990及吉西他滨抗性细胞系SW1990/GZ的lncRNA(long non-coding RNA,长链非编码RNA)与mRNA表达谱变化,初步筛选出与化疗抗性相关的lncRNA分子,同时通过高级生物信息学分析方法如lncRNA靶基因预测、lncRNA-mRNA共表达网络等,从新的角度探索胰腺癌耐药发生的分子机制,为胰腺癌耐药患者提供潜在的治疗靶点。方法:通过体外间歇浓度梯度递增法构建人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株SW1990/GZ;MTT法分别检测在化疗药物培养下SW1990/GZ及亲本细胞SW1990的增殖活性,绘制生长曲线图,计算IC50值(half maximal inhibitory concentration,半数抑制浓度)及耐药指数;光学显微镜下观察细胞形态学上的改变;运用二代转录本测序的方法分析耐药细胞株SW1990/GZ中lncRNA和mRNA转录本在表达上相较于亲代细胞SW1990的差异,同时利用Cufflinks法拼接出新的lncRNA转录本;对差异的lncRNA和mRNA行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR对差异表达谱中随机挑选的6个上调和6个下调的lncRNAs(AC006262.5、MIR210HG、RP11-23P13.6、LINC00173、RP11-497G19.1、RP11-1055B8.4、RP11-48O20.4、RP11-442H21.2、EPB41L4A-AS1、SNHG1、SNHG5、RP11-426C22.6)进行验证。结果:1、成功建立了人胰腺癌吉西他滨耐药细胞系SW1990/GZ,在细胞学形态上,SW1990/GZ较亲本SW1990呈现明显的肿胀,梭形的特点;SW1990/GZ和SW1990对化疗药物的IC50值分别为2.393+0.145 uM vs.234.9+4.51 uM,计算其耐药指数(RI)高达98.2。2、二代转录本测序结果显示,吉西他滨耐药细胞系SW1990/GZ中lncRNA和mRNA表达谱与亲代细胞系SW1990有着显著差异;其中,有113条lncRNAs(105条已注释)表达上调2倍以上,92条lncRNAs(75条已注释)表达下调超过2倍;同样,有391条mRNAs表达量增加2倍以上,而表达下调超过2倍的mRNAs有456条。3、实时荧光定量PCR提示:与化疗敏感的细胞系SW1990相比,化疗抗性的SW1990/GZ中lncRNA基因:AC006262.5、MIR210HG、RP11-23P13.6、LINC00173、RP11-497G19.1、RP11-1055B8.4表达上调,而lncRNA基因:RP11-48O20.4、RP11-442H21.2、EPB41L4A-AS1、SNHG1、SNHG5、RP11-426C22.6表达下调。4、通过差异性lncRNA靶基因预测,顺式调控的mRNA中有6.5%转录本与差异性mRNA重合,反式作用的mRNA转录本中有10.7%与差异性mRNA重合。5、GO分析差异lncRNA靶向的差异mRNA主要跟细胞过程,细胞内,结合过程等方面相关,Pathway分析发现其主要参与糖原信号途径、代谢过程、膀胱癌、胰岛素抵抗、PI3K/AKt通路、VEGF信号途径、P53通路等调节通路。6、共表达网络分析显示,相关系数大于0.995且P<0.05的差异lncRNA和mRNA中共有1052个节点和7049条连接。同时,共表达网络中前3个核心lncRNA基因分别是MIR210HG、SNHG1和LOC729970,而前3个核心mRNA基因分别是RAB3D、DDX17和SPNS2。结论:1、与敏感细胞系SW1990相比,成功构建的人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株SW1990/GZ的生物学特性发生了显著的改变;2、通过二代测序技术除筛选胰腺癌吉西他滨耐药细胞株中已知的差异表达lncRNA转录本,还能着重于发现新的lncRNA;3、对二代测序技术鉴定出的胰腺癌吉西他滨耐药细胞株中异常表达的lncRNA转录本通过实时荧光定量PCR进行验证,其结果的一致性进一步提高了该测序结果的可信程度,结合高级生物信息学分析显示差异表达的lncRNA可能在胰腺癌的分子耐药机制中发挥重要的作用,并有可能成为治疗胰腺癌化疗耐药的潜在基因靶点。