一．来源于人树突状细胞的Ⅰ型细胞因子受体CRL2的表达分布和功能的初步研究 树突状细胞(Dendritic Cells，DC)是人体免疫系统最重要的抗原递呈细胞，通过对人DC的cDNA文库进行大规模测序，我们分离到一个新型的Ⅰ类细胞因子受体并命名为CRL2，文章发表于BBRC(2001；281：878-83)，同一年，美国DNAX研究所证实了人胸腺基质细胞来源的淋巴生成素(human Thymic Stromal Lymphopoietin，TSLP)是TSLPR的细胞因子，通过同源性的比较发现，CRL2就是TSLPR。CRL2和IL-7受体IL-7R共同组成了受体复合体参与TSLP的信号传导过程。这个研究所在研究TSLP的功能方面做了大量的工作，并且发现了TSLP具有许多重要的功能：TSLP主要作用于造血系细胞，它可以促进DC的成熟并可以抑制其凋亡过程，TSLP处理过的DC可以调节CD4~+和CD8~+T细胞在炎性过程中的反应。人们发现，小鼠如果大量表达鼠的TSLP就会导致混合型冷球蛋白血症并发肾脏疾病，这种疾病和人的冷球蛋白相关的血管球型肾炎比较类似。所有上述的工作都证明了TSLP在各种的生理及病理过程中都起到重要的作用。 在这项工作中，我们对TSLP的受体分子CRL2和IL-7R的表达分布做了进一步的研究，并对它的生理功能做了初步的探讨。 在2001年我们实验室发表的工作中，主要研究了CRL2在不同肿瘤细胞和人体组织中的分布。CRL2分子由349个氨基酸残基构成，包括22个氨基酸构成的信号肽样结构及20个氨基酸构成的跨膜区，210个氨基酸构成的细胞外段具有Ⅰ型细胞因子家族典型的结构域(PSDWS)，细胞内段含有BOX1结构，可以和一些激酶结合。在 浙江大学博士学位论文人的所有的分子中，CRLZ与IL一13受体的界结构最为类似，其同源性为26%.Northernblot分析结果表明，CRLZ严格的表达在脾脏和外周血白细胞上，而其他组织包括胸腺、前列腺、翠丸、卵巢、小肠、大肠、心脏、脑、胎盘、肝脏、骨骼肌、肾脏和胰腺都没有表达。 在这部分工作中，我们主要研究了CRLZ在不同细胞系或不同细胞系在不同刺激条件下的表达。主要研究了外周血单核细胞来源的 MoDC在不同条件刺激的情况下的CRLZ表达。DC在受到LPS的作用时，其表达升高非常明显，另外在活化型抗CD4O抗体的作用下，12小时后就有明显的升高，在24小时后略有下降，但表达t仍旧非常高。外周血诱导的DC随着培养时间的改变，CRLZ逐渐开始表达。 CRLZ在新鲜分离的外周血单核细胞中没有表达，在LPS刺激时，其表达明显，这个结果和我们从前的工作是一致的。我们还检测了THP一1细胞在不同的刺激条件下如TNF一a、CpG ODN、HZOZ和NO作用下的表达情况，结果发现THp一l在受到上述刺激时，表达的CRLZ略有升高，但远没有前面几种细胞变化明显。另外，我们还检测了CRLZ在其他一些造血系细胞中的表达情况，如BMSCs细胞在受到PMA刺激时，可呈现诱导性表达，Jurkat细胞，NK92细胞在合适的条件下，也可出现CRLZ的表达。在肿瘤细胞中，CRLZ的分布是较广泛的，在检测的几种细胞中都有程度不同的表达分布。 作为一个与CRLZ共同组成受体复合体的分子，IL一7R的表达分布与CRLZ的分布的相关性对TSLP的功能发挥是至关重要的。我们同样也研究了IL7R的表达分布情况。令人感兴趣的是IL一7R的表达方式和CRLZ的表达方式相类似，DC在活化型抗CD4O抗体的作用下，IL一7R表达升高明显，变化趋势与CRLZ完全一致。在LPS的刺激下，IL一7R升高明显。在DC的培养阶段，IL一7R的变化趋势与CRLZ一致，都是在第5天有升高的现象。 用与检测CRLZ相同的模板来观察IL一7R在THP一1中的表达时，发现其表达升高不是非常明显。在BMSCs细胞中，IL一7R在受到LPS或PMA的刺激时，表达略有下降。在肿瘤细胞中的表达范围要比CRLZ小，仅仅在HeLa、A172和CaoV中有表达。 作为同一个受体复合体的两个分子，CRLZ和IL一7R的结构也是最为相似的，它们的同源性为39%。二者表达的一致性在另外一点也说明他们是协同发挥作用的。 浙江大学博士学位论文LPS是一个强有力的炎性因子，它可能导致致命的炎性反应的发生。LPS引起的信号传导途径可以导致细胞发生一系列的反应，使基因的表达发生改变，调节免疫功能。包括产生一些趋化因子及产生热休克蛋白等。DC是最重要的抗原递呈细胞，LPS刺激导致两种细胞因子受体的表达大大升高，可能使DC对TSLP的敏感性加强，从而引发进一步的生物学效应。 同时，我们也研究了TSLP的表达分布情况，仅仅在胎肺和胎肺来源的W卜38细胞中检测到了TSLP表达，根据已知文献的报道IL一7R同时也是比一7的受体，在我们的试验条件下，仅仅在骨髓基质细胞和SMMC7721细胞中检测到其表达。 转染了TSLP表达载体的细胞能够表达分子量约为25kDa的蛋白质，这可能与TSLP分子上有糖基化位点有关。表达的TSLP蛋白能够分泌到细胞外，所以，我们选用了?