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pax6基因是脊椎动物胚胎发育尤其是眼睛发育过程中的重要调控因子,也是最早发现在晶状体正常发育和再生过程中都表达的一个基因。已有研究结果表明,pax6蛋白存在多种不同的蛋白亚型,这些多种不同蛋白亚型控制着pax6调控作用的多样性。本研究以花背蟾蜍正常发育12-25期的胚胎为实验材料；花背蟾蜍晶状体再生模型为基础,收集花背蟾蜍蝌蚪晶状体再生不同天数的组织材料,用液氮将胚胎及组织材料研磨后动物胚胎裂解液裂解的方法获得组织全蛋白。根据考马斯亮蓝G-250法实验原理用紫外分光光度计读取各期蛋白溶液在595nm处的吸光值,计算得出花背蟾蜍胚胎发育12-25期以及晶状体再生不同天数组织全蛋白的蛋白浓度。在各期蛋白上样量相同的条件下进行SDS-PAGE蛋白电泳,并用Western blot免疫印记方法检测分析pax6、pax6 variant在花背蟾蜍胚胎发育12-25期以及晶状体再生不同天数蛋白表达量的变化。Western blot实验检测结果表明：pax6基因在花背蟾蜍胚胎正常发育12-25期中的17期蛋白表达量最高,灰度分析MOD值为0.355,20期蛋白表达量与19、21期相比,蛋白表达出现第二个高峰,灰度分析MOD值为0.229,19、21期的MOD值为0.100和0.104；pax6在花背蟾蜍晶状体再生第7天蛋白表达量增高明显,灰度分析MOD值为0.219,pax6在晶状体再生第30天蛋白表达量最高,MOD值为0.260。Pax6 variant的蛋白表达Western blot检测结果表明：pax6 variant基因在花背蟾蜍胚胎正常发育12-25期中的16期蛋白表达量最高,灰度分析MOD值为1.932,22期蛋白表达量与21、23期相比,蛋白表达出现第二个高峰,灰度分析MOD值为1.486；pax6 variant在晶状体再生第5天蛋白表达量增高,灰度分析MOD值为0.331,pax6 variant在晶状体再生第21天蛋白表达量最高,MOD值为1.801。以上结果进一步验证了pax6 variant基因在花背蟾蜍胚胎发育和晶状体再生过程中发挥着重要的作用,并表明二者之间存在着负显性调控作用。本课题的研究结果对以后深入研究探讨pax6 variant基因在两栖类胚胎发育和晶状体再生过程中的实验模型以及作用机理奠定了良好的基础,也为今后研究探索pax6不同结构蛋白亚型的功能提供了必要的依据。