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目的将来源于健康产妇的脐带血进行体外分离、培养出间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCS),诱导成肝样细胞并进行鉴别,探讨间充质干细胞体外培养和定向分化为肝样细胞的可行性,为终末期肝病的肝细胞移植治疗和生物型人工肝提供一种新的细胞来源。方法采集正常产妇脐带血,密度梯度离心法和贴壁法分离,培养纯化脐血MSCS,使用肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导MSCS。采用RT-PCR和免疫细胞化学法检测肝样细胞标志物的表达情况并进行糖原染色检测细胞糖原的表达;采用透射电镜观察间充质干细胞和诱导肝样细胞的超微结构;流式细胞仪检测间充质干细胞表面抗原CD34,CD44表达情况。结果1.采用密度梯度离心法和贴壁法分离接种的MSCs形态大小均一透亮度好,24小时内贴壁,以后逐渐增多,呈克隆性生长,3天左右可见梭形、三角形细胞,10天左右达到对数生长期。细胞传至第三代时,细胞融合成单层,梭形突起变长,排列有明显方向性,集落呈旋涡状生长,台盼蓝染色细胞存活率＞95%。2.经过传代,纯化,诱导的细胞由长梭形慢慢开始变圆,呈放射状的细胞排列结构逐步消失,形态变短,变类圆形或多角形,胞浆出现颗粒,部分出现双核,折光性强,分裂相多。非诱导组仍保留梭型的细胞形态。3.标志物检测:非诱导组始终没有见到肝细胞的标志物白蛋白(albium,ALB)、糖原表达,甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)第0天有少量表达此后不再表达;诱导组可以检测到肝细胞的标志物AFP、ALB和糖原的明显的表达。4.培养至第三代的细胞表面抗原CD44阳性表达,不表达CD34。结论1.采用密度梯度离心法和贴壁培养法可以在体外成功分离培养出脐带血MSCS。2.经HGF诱导的细胞初步确定为肝样细胞。