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研究目的:AS是目前临床上常见的慢性炎症性疾病,易损斑块破裂引发急性血管栓塞事件是其致病致死的主要原因。炎症反应不仅加剧AS进程,也可促使粥样斑块恶化趋于破裂。自噬是细胞的主要分解代谢程序,是维护机体内环境稳定的重要方式。巨噬细胞是AS发展中的关键炎症细胞,其炎症反应与自噬程度影响斑块稳定性的高低。课题组团队前期实验研究发现通过诱导细胞自噬可抑制血管炎症反应进而稳定易损斑块。本课题从巨噬细胞自噬和炎症反应入手,进一步探讨解毒活血方对APOE-/-AS小鼠血清血脂及炎症因子水平、主动脉病理及自噬水平的通路调控机制,为解毒活血方科学防治AS易损斑块提供理论支撑。方法:选取6只C57BL/6J小鼠及36只APOE-/-小鼠分组喂养,模型组、中药治疗组及雷帕霉素组予高脂饲料喂养复制AS模型,第8周时分别灌服生理盐水、解毒活血方及雷帕霉素,第11周时解剖取材。酶标仪检测小鼠血清TC、TG、HDL、LDL及炎症因子MCP-1、IL-6水平,主动脉根部HE染色,透射电镜观察主动脉组织自噬体的形成及数量,Western Blot法测定主动脉根部Beclin-1、LC3蛋白及PI3K、Akt、mTOR通路蛋白表达水平。结果:1.各组小鼠体质量变化对比情况:小鼠体质量每两周测量一次,第七周时测量发现各组小鼠体质量较开始时均有所增长,以高脂饲料喂养小鼠增长明显。且普通饲料喂养的空白组及对照组小鼠精神状态较好,皮毛光亮,活动灵活;高脂饲料喂养的各组小鼠精神状态稍差,形体较肥胖。第八周时开始给药并继续予同前饲料喂养,给药周期共四周,结束后发现中药中、高剂量组和雷帕霉素组较模型组体质量下降明显（P＜0.05）。2.各组小鼠血清血脂结果:高脂饲料喂养的各组小鼠TC、TG、HDL、LDL水平较普通饲料喂养的空白组及对照组高。与模型组相比:中药低剂量组TG较模型组低（P＜0.05）;中、高剂量组和雷帕霉素组TC、TG、LDL均降低（P＜0.05）;各组HDL水平较模型组升高（P＜0.05）。3.各组小鼠血清MCP-1、IL-6表达情况:与对照组相比:模型组MCP-1、IL-6水平升高（P＜0.05）,空白组MCP-1水平降低（P＜0.05）。与模型组相比:中药低剂量组MCP-1水平降低（P＜0.05）,中、高剂量组及雷帕霉素组MCP-1、IL-6水平明显降低（P＜0.05,P＜0.01）。4.主动脉根部HE染色示:空白组小鼠主动脉血管壁结构完整,未见动脉粥样斑块。对照组血管内壁不平整,部分血管壁增厚。模型组血管内壁不平整光滑,可见明显粥样斑块,斑块内可见炎性细胞浸润,斑块附着处血管内膜明显增厚且结构紊乱,中膜增生。中药组及雷帕霉素组血管内壁欠光滑,可见少量粥样斑块,炎性细胞浸润程度及血管壁厚度较模型组减轻。5.透射电镜自噬体观测结果:自噬体以双层膜结构为主。空白组和对照组小鼠主动脉组织可见少量自噬体,线粒体结构完整;模型组自噬体和线粒体数量更少,且线粒体结构不完整。治疗组线粒体结构尚完整,中药中剂量组和雷帕霉素组可见自噬体和自噬溶酶体,低剂量组及高剂量组自噬体和自噬溶酶体数量增多。6.Western Blot法测定主动脉根部Beclin-1、LC3蛋白及PI3K、Akt、mTOR通路蛋白表达结果:（1）各组Beclin-1、LC3蛋白表达水平比较:与对照组相比,模型组Beclin-1蛋白表达下降（P＜0.05）,空白组蛋白表达无显著差异（P＞0.05）。与模型组相比,中药组与雷帕霉素组Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达及LC3Ⅱ/Ⅰ比值上升明显（P＜0.05,P＜0.01）。（2）各组PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平比较:与对照组相比,模型组PI3K、Akt、mTOR蛋白表达上升（P＜0.05,P＜0.01）,空白组蛋白表达无显著差异（P＞0.05）。与模型组相比,中药低剂量组mTOR蛋白表达下降（P＜0.05）,中药中、高剂量组与雷帕霉素组PI3K、Akt、mTOR蛋白表达明显下降（P＜0.05,P＜0.01）。结论:1.解毒活血方有效降低AS小鼠体质量及血清血脂水平。2.解毒活血方降低AS小鼠血清MCP-1、IL-6表达水平,减轻斑块内炎症反应,降低斑块易损性。3.解毒活血方可抑制AS小鼠粥样斑块形成,减少炎症细胞浸润。4.解毒活血方可增加AS小鼠自噬体数量,诱导巨噬细胞自噬抑制斑块内炎症反应。5.解毒活血方显著上调Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达,降低PI3K、Akt、mTOR蛋白表达,说明其抑制炎症反应、稳定易损斑块的机制可能与直接抑制mTOR信号分子,间接抑制其上游PI3K/Akt通路因子活化有关。