健中愈疡片调控NSAIDs胃粘膜损伤COX-2信号中NF-κβ通路转导的研究

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研究目的:观察中药制剂健中愈疡片治疗非甾体类抗炎药所致急性胃黏膜损伤的疗效,并研究探讨该药成分防治非甾体类相关胃病的作用机制,为将来进一步的研究打下良好的基础。研究方法:第一步:动物分组:将SPF级Wistar大鼠110只,雌雄各半,随机将110只大鼠分为6组,正常对照组10只,模型组、党参组、健中愈疡片高、低剂量组分别为20只,西药组(奥美拉唑)20只。第二步:动物造模及给药:正常组给予常规喂养,其余各组给予按照体重不同给予相对应的药物,治疗7天,如西药组给予奥美拉唑,党参组给予党参冲剂,治疗第7天开始消炎痛造模,并立即将各组大鼠取一半,进行切来取胃观察,胃粘膜损伤情况,同时用试剂进行测试,其余大鼠同前喂养方式,坚持给药,待7天后再次取胃观察,检测胃粘膜物质。第三步:采用免疫印迹(western blot)法,每组称取250mg胃黏膜组织提取蛋白质,取等量蛋白质,SDS-PAGE电泳,转至硝酸纤维素膜,封闭,分别加入Ⅰ抗(美国Santa Cruz Biotech生产):COX-2多克隆抗体、兔抗鼠CREB多克隆抗体,洗膜,加入羊抗兔IgG-HRP,显示出特异性蛋白条带,用计算机图像分析系统测定灰度值,来判断蛋白相应含量。研究结果:1.大鼠胃大体形态观察造模7小时后,模型组大鼠胃粘膜可见大量溃疡,溃疡呈规则圆形、较表浅,溃疡周围见黏膜充血水肿,未见大鼠局部粘膜坏死,胃粘膜大体评分实验组明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);西药组、党参组、健中愈疡片低剂量组可见散在浅溃疡,局部粘膜轻度组织充血水肿,胃损伤大体评分各组明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);健中愈疡片高剂量组散在轻度充血水肿,偶见浅溃疡;胃损伤大体评分各组明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。造模7天后,模型组大鼠胃粘膜可见大量溃疡,溃疡呈规则圆形、较深凹陷溃疡,溃疡周围见黏膜充血水肿,3只局部粘膜有坏死,胃粘膜大体评分实验组明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);西药组、党参组、健中愈疡片低剂量组可见散在浅溃疡,局部粘膜轻度组织充血水肿,未见局部粘膜坏死,胃损伤大体评分各组明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);健中愈疡片高剂量组散在轻度充血水肿,偶见浅溃疡;胃损伤大体评分各组明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.造模后溃疡抑制百分率结果在造模后溃疡抑制百分率结果分别为:西药组、党参组、高剂量健中愈疡片组、低剂量健中愈疡片组依次是:75.31%、63.60%、92.27%、65.50%。与模型组、西药组、党参组相比较具有统计学意义(P<0.05)。七天后溃疡抑制百分率结果分别为西药组、党参组、高剂量健中愈疡片组、低剂量健中愈疡片组依次是:83.38%、71.64%、96.43%、73.40%,与模型组、西药组、党参组相比较具有统计学意义(P<0.05)。3.不同组中胃组织含胃黏膜NF-κβ表达增加,COX-2表达较模型组增加,造模7小时后NF-κβ各组的平均值分别为:模型组平均为(1.34±0.13),西药组平均为(1.83±0.14),党参组平均为(3.91±0.16),健中愈疡片组高剂量平均为(4.67±0.18)健中愈疡片组低剂量平均为(2.90±0.17)。COX-2各组的平均值分别为:模型组平均为(0.69±0.12),西药组平均为(0.72±0.13),党参组平均为(0.68±0.14),健中愈疡片组高剂量平均为(0.46±0.16)健中愈疡片组低剂量平均为(0.57±0.15)。与模型组相比较,各治疗组都具有显著差异(P<0.05);中药组与西药组相比较,具有显著差异(P<0.05);党参组相比较,具有显著差异(P<0.05);健中愈疡片组高、低剂量组相比较,具有显著差异(P<0.05)。造模7天后NF-κβ各组的平均值分别为:正常对照组平均为(0.00±0.00),模型组平均为(1.38±0.13),西药组平均为(2.63±0.14),党参组平均为(2.73±0.16),健中愈疡片组高剂量平均为(5.67±0.18)健中愈疡片组低剂量平均为(3.09±0.17)。COX-2各组的平均值分别为:正常对照组平均为(0.00±0.00),模型组平均为(0.70±0.12),西药组平均为(0.72±0.14),党参组平均为(0.73±0.16),健中愈疡片组高剂量平均为(1.57±0.15)健中愈疡片组低剂量平均为(1.46±0.13)。与空白组对照,与模型组相比较,各治疗组都具有显著差异(P<0.05);中药组与西药组相比较,具有显著差异(P<0.05);党参组相比较,具有显著差异(P<0.05);健中愈疡片组高、低剂量组相比较,具有显著差异(P<0.05)。4.结论健中愈疡片对非甾体类相关性胃病确疗效确切,可明显促进溃疡创面的愈合。该中药方通过提高大鼠胃粘膜组织中环氧化酶和前列腺素的含量,促进胃粘液分泌,提高胃粘膜修复作用,降低炎性介质的释放,并可降低胃组织中胃黏膜NF-κβ的含量,减少血管内物质活性对胃粘膜的损伤,促进微循环,,从两方面发挥保护和治疗胃粘膜组织的作用,体现了中医治疗本病的优势。
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