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研究背景：动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是严重威胁人类健康的心脑血管疾病。体内脂代谢紊乱与动脉粥样硬化斑块的形成密切相关。类法尼醇X受体(farnesoid X receptor, FXR)是孤儿核受体(orphan nuclear receptor)家族成员,是内源性胆汁酸(bile acids)的感应器(sensor),鹅脱氧胆汁酸(chenodexycholic acid, CDCA)为其最适天然配体。FXR通过调节诸多靶基因而调控脂类、胆固醇和葡萄糖的代谢,其在维持脂代谢平衡、胆汁酸代谢过程中发挥重要的调节作用。FXR与AS的发生密切相关。载脂蛋白(apolipoproteinM, apoM)是一种新近发现的载脂蛋白,它含有一个特征性的疏水结合盒。成熟的apoM保留了具有“疏水锚”作用的信号肽。研究发现apoM可能通过此信号肽锚着在高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)磷脂单层中,并且在HDL中含量极为丰富。研究结果表明apoM可通过影响胆固醇的逆向转运过程参与HDL的代谢过程,进而发挥重要的抗AS的功能。由于FXR和apoM均高表达于肝脏,且二者均与AS密切相关。那么apoM是否受FXR的调节?弄清该问题,对进一步阐明二者在AS发生发展中的作用,为防治AS的新靶点提供新的科学依据。研究目的：探讨FXR对apoM表达的影响及其调控的可能机制。研究方法：(1)选取肝癌细胞株HepG2和胎肝细胞株L02为细胞模型,经FXR激动剂(CDCA)处理细胞24h后,用RT-PCR法检测apoM表达的变化；经FXR激动剂(CDCA)处理细胞12h后,再用FXR的抑制剂(Guggulsterones)处理细胞24h,RT-PCR法检测apoM表达的变化。(2)选取肝癌细胞株HepG2为细胞模型,Western blotting免疫印迹法检测apoM蛋白表达的差异。(3)选取C57BL/6小鼠为动物模型,喂食CDCA后,RT-PCR法检测小鼠肝脏组织apoM mRNA表达的变化,Western blotting免疫印迹法检测小鼠肝脏组织apoM蛋白表达的差异。同时用免疫组化法检测小鼠肝、肾组织的表达。用匀相测定法检测小鼠血脂的变化。(4)通过生物信息学分析,在线预测人apoM基因5’侧翼启动子区域AGGTCAggAGTTCA存在FXR可能结合位点(DR2)；提取HepG2细胞基因组DNA, PCR法扩增人apoM报告基因,构建重组质粒PGL3-basic/apoM(-1900～+165含DR2序列)和PGL3-basic/ apoM(-1800～+165不含DR2序列)。脂质体法将vpFXR真核表达质粒瞬时共转染HepG2细胞,通过荧光素酶报告基因检测FXR对apoM启动子活性影响。研究结果：(1)在FXR激动剂(CDCA)处理的人肝癌细胞HepG2和胎肝细胞L02中,发现FXR显著下调apoM的表达(p<0.05)。(2)在FXR活化后再用抑制剂(Guggulsterones)处理的人肝癌细胞HepG2和胎肝细胞L02中,发现FXR显著上调apoM的表达(p<0.05)。(3)C57BL/6小鼠喂食含CDCA的食物,FXR活化后在体内可下调小鼠肝脏apoM的表达。(4)小鼠免疫组化结果显示：随着CDCA浓度的增加,小鼠肝脏和肾脏apoM的表达下降。(5)小鼠血脂测定结果显示：HDL和TC随CDCA浓度的升高而下降,LDL随CDCA浓度升高而升高,TG随着CDCA浓度的升高先升高再下降。(6)根据生物信息学分析人apoM基因转录起始位点上游3000bp区域,得出在-1863bp处存在可能FXR结合位点(DR2)。通过共转染实验结果显示：FXR可降低人apoM(-1900～+165)含有DR2序列启动子片段的转录活性,且下调幅度为对照的40%。而FXR对不含有DR2序列的人apoM(-1800～+165)启动子片段活性无影响。结论：(1)用FXR激动剂(CDCA)处理细胞后,发现FXR显著下调apoM的表达(p<0.05)。(2)用FXR抑制剂(Guggulsterones)处理细胞后,发现FXR显著上调apoM的表达(p<0.05)。(3)FXR活化后可下调小鼠体内apoM的表达。(4)通过共转染实验结果得出：FXR可能通过人apoM基因启动子特异结合序列(DR2)下调apoM基因表达。以上研究为初步探讨FXR和apoM在脂代谢以及AS等相关疾病中的作用提供了重要的实验依据。