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背景:线粒体是广泛存在于动物和人体细胞中的一种细胞器,为细胞的生命活动提供场所,其作用是为细胞新陈代谢提供能量。细胞需要随时监测其能量水平状态,在不同的营养物质和能量状态下需要不断地通过细胞内的代谢调控途径来调节其代谢水平以达到能量水平的稳态。其中磷酸腺苷包括三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）和单磷酸腺苷（AMP）是监测细胞内能量代谢变化的化合物。因此,在不同疾病状态、药物作用下,测定ATP、ADP、AMP等主要能量物质指标含量变化,可部分提示生物组织及细胞的能量代谢变化、机体状况以及用于药物疗效评价。目的:本研究在于建立高效液相色谱方法分析能量代谢产物,并用于研究不同功效中药对小鼠能量代谢产物的影响。方法:1、心肌组织中能量代谢产物ATP、ADP、AMP高效液相色谱分析方法的研究:预冷（4℃）的0.4 mol/L高氯酸萃取心肌组织并调节p H值到中性后,使用多孔石墨碳柱的高效液相色谱（4.6 mm×100 mm,5μm）梯度洗脱进行分离分析。流动相由A（10 mmol/L硼砂水溶液,p H=9.18）和B（四氢呋喃:乙腈,1:1,v/v）组成,流速0.8 m L/min,检测波长254 nm,柱温35℃。2、人参、川芎、六味地黄丸、四逆汤四种不同功效中药对正常小鼠心肌能量代谢产物的影响:ICR系小鼠74只随机分为对照组、人参2天组（3.7 g/kg）、人参8天组（3.7g/kg）、六味地黄丸2天组（1.8 g/kg）、六味地黄丸8天组（1.8 g/kg）、川芎2天组（4.1 g/kg）、川芎8天组（4.1 g/kg）、四逆汤2天组（6.1 g/kg）、四逆汤8天组（6.1 g/kg）,每组7-8只,各组动物灌胃容积为每天20 m L/kg,对照组给予相应容量蒸馏水。给药2天组,连续给药2天,第二天给药1小时后,解剖小鼠,取出心脏储存在-80℃备用;给药8天组,连续给药8天后,解剖小鼠,取出心脏储存在-80℃备用。心肌组织经匀浆和沉淀蛋白后HPLC法检测能量代谢物质ATP、ADP和AMP含量,计算腺苷酸总含量TAN（ATP+ADP+AMP）、AEC=（ATP+1/2 ADP）/TAN、ATP/ADP与AMP/ATP比值。3、六味地黄丸对阴虚小鼠肝损伤的保护及能量代谢的改善作用:ICR系小鼠30只随机分为正常组、模型组和六味地黄丸组（1.8 g（生药）/kg）,除正常组外其他小鼠每天用皮下注射L-甲状腺素（280（?）g/kg）方法建立阴虚证模型。连续注射1周后,继续造模同时开始灌胃六味地黄丸溶液,每天1次,连续3周,期间测量小鼠体质量、体温、自主活动次数、痛阈和心率,评价阴虚证模型以及药物的对抗作用。实验结束时检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性、总蛋白（TP）、总胆固醇（TC）和三酰甘油（TG）含量;剥离肝脏并称重,计算肝脏指数;HPLC法检测肝脏能量物质磷酸肌酸（PCr）、ATP、ADP和AMP含量,计算腺苷酸总含量TAN;检测肝脏环磷酸腺苷（c AMP）含量。结果:1、心肌组织中能量代谢产物ATP、ADP、AMP高效液相色谱分析方法的研究:ATP、ADP、AMP各组分分离良好,峰面积重复性（RSD）为1.33-2.53%,各磷酸腺苷的浓度在线性范围内（ATP:0.71-45.8μg/m L;ADP:1.3-40.8μg/m L;AMP:1.69-54.1μg/m L）的相关系数均大于0.999,LOD和LOQ浓度范围分别为0.17-0.21μg/m L和0.66-0.81μg/m L,三个成分的平均加标回收率为93.6-104.5%。2、人参、川芎、六味地黄丸、四逆汤四种不同功效中药对正常小鼠心肌能量代谢产物的影响:给药2天实验中,与对照组比较,六味地黄丸组、川芎组、四逆汤组心肌组织中的ATP含量显著增加;川芎组、四逆汤组的ADP含量显著增加;六味地黄丸组、四逆汤组的ATP/ADP比值显著升高。在给药8天实验中,与对照组比较,四逆汤组的ATP、ADP含量显著增加;川芎组的ADP含量、AEC水平显著增加;六味地黄丸组的AEC水平显著增加。3、六味地黄丸对阴虚小鼠肝损伤的保护及能量代谢的改善作用:模型小鼠体质量、体温、自主活动次数、痛阈和心率等阴虚指标发生了异常,六味地黄丸有一定的改善作用。与正常组比较,模型组肝脏指数和血清ALT和AST活性显著升高,血清TC和TP水平显著降低,肝脏组织ATP、ADP、AMP、c AMP、TAN含量显著降低。与模型组比较,六味地黄丸组血清ALT和AST活性显著降低,血清TC和TP水平显著升高,肝脏组织ADP、c AMP、TAN含量显著升高,ATP、AMP含量也有升高趋势。结论:1、本研究建立了HPLC法,使用多孔石墨碳柱,以10 mmol/L水溶液-ACN-THF组成的流动相分离和定量检测小鼠心肌组织中ATP、ADP和AMP的含量。该方法准确,专一,精确且可重现,满足生物样本中磷酸腺苷含量的测定要求。2、四种不同功效中药对正常小鼠能量代谢的影响是有区别的,该实验中人参对正常小鼠心肌能量代谢的影响较小,川芎、六味地黄丸、四逆汤对正常小鼠心肌能量代谢有一定的促进作用。3、六味地黄丸对L-甲状腺素诱导的阴虚小鼠肝脏损伤具有一定的保护作用,这可能与改善肝脏组织能量代谢紊乱作用有关。