遵义烟区是全国优质烤烟的主产区之一,由于长期烤烟连作和单施化肥,导致土壤结构变差、肥力下降、烤烟病害严重、生长发育不良、产质量降低及风格特色弱化等,这些问题已成为烟区烤烟可持续发展的重要障碍,亟待解决。在其他作物上,通过合理轮作和施用有机肥能有效改良土壤结构,改善土壤肥力和微生态环境,促进作物生长发育和提高产质量。为此,本研究以遵义烤烟长期定位试验为平台,选择烤烟连作和烤烟-玉米轮作两种种植制度,单施化肥和有机无机配施两种施肥方式,研究了种植制度和施肥对烤烟生长发育和产质量,土壤理化生物学性质、以及土壤细菌和真菌群落的影响,以期为提升遵义烟区烟地生产力、保持健康的植烟土壤环境和实现烟地的可持续利用提供理论依据。主要研究结果如下:1)轮作和有机无机配施显著影响烤烟生长发育、产质量和化学成分。在烤烟现蕾期,与连作-单施化肥处理相比,轮作-配施有机肥处理显著增加烤烟株高、茎围、最大叶宽、最大叶长和最大叶面积,使产量提高30.7%、产值增加47.2%,并使烟叶化学成分更加趋于协调。2)轮作显著降低烤烟的病害。与连作相比,轮作烤烟花叶病的发病率和病情指数分别降低了45.8%和56.0%,青枯病的发病率和病情指数依次下降了56.1%和50.0%。3)轮作和有机无机配施显著改善植烟土壤结构和通气条件。与连作-化肥相比,轮作-配施有机肥的土壤容重下降15.7%,孔隙度增加13.4%。与初始土壤相比,连作土壤的pH下降,而轮作-配施有机肥处理的pH无显著变化。4)轮作显著影响植烟土壤的微生物数量与生物量。与连作相比,轮作显著提高植烟土壤微生物量碳、氮含量及细菌数量,降低微生物量碳氮比和真菌数量。5)Venn分析和主成分分析表明,种植制度和施肥方式分别是影响细菌和真菌多样性的主要因素。轮作土壤中的细菌丰富度、均匀度和多样性均明显高于连作土壤,而单施化肥土壤的真菌丰富度、均匀度和多样性均高于有机无机配施土壤。6)在细菌组成中,变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinomyces)、绿弯菌门(Chloroflexi)和酸杆菌门(Acidobacteria)是植烟土壤的优势菌门,轮作土壤中变形菌门的相对丰度明显高于连作土壤,而绿弯菌和酸杆菌门则低于连作土壤。在真菌组成中,子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)和接合菌门(Zygomycota)是优势菌门,其中子囊菌门的相对丰度以连作土壤较高,而担子菌门以轮作土壤较高。因此,轮作及有机无机配施有利于促进烤烟生长、增加烤烟产质量、协调烟叶化学成分,有益于改善植烟土壤理化环境及生物活性,对提升烟地生产力、保持植烟土壤健康及可持续利用具有的积极作用,是一种用养结合的种植施肥模式,值得在遵义烟区推广。