论文部分内容阅读
第一部分门静脉回流、胰液内引流式大鼠胰十二指肠移植模型的建立目的建立一种稳定、符合生理模式的大鼠胰十二指肠移植模型。方法建立糖尿病大鼠模型,以雄性健康近交系SD大鼠作为实验动物,予链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）50mg/kg一次性尾静脉注射:注射后隔日测血糖及尿糖,血糖连续两次超过16.8mmol/L且尿糖反应强阳性者判断为糖尿病诱导成功,作为移植受体使用。行整块胰十二指肠移植,采用供体腹主动脉和受体腹主动脉端侧吻合,供体门静脉和受体肠系膜静脉端侧吻合,供体十二指肠与受体空肠侧侧吻合,术后1d测血糖,浓度低于11.2mmol/L视为移植成功。结果共进45次大鼠胰十二指肠移植实验,其中38例术后血糖正常且存活超过7天,移植成功率为86%。供体手术时间51.25±3.86min:受体手术时间55.62±2.89min。移植胰的热缺血时间＜2min.冷缺血时间平均38min。血糖变化:术前平均（18.27±1.21）mmol/L,术后1、3、5天的血糖平均为（4.89±0.79）mmol/L、（5.13±1.14）mmol/L以及（5.82±1.39）mmol/L。失败原因分别为腹腔感染、吻合口出血、静脉吻合口血栓等结论本胰腺移植模型操作简便、符合正常生理特点,冷缺血及腹主动脉阻断时间短,能够较好地模拟临床胰腺移植过程,适用于胰腺移植的免疫和生理研究。第二部分PD-L1.Ig与1,25（OH）2D3联合应用对异基因大鼠胰腺移植后急性排斥反应的影响目的:探讨PD-L1Ig联合1,25（OH）2D3对大鼠胰腺移植急性排斥反应的免疫调控作用以及对大鼠移植胰腺存活时间的影响。方法:以F344大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,建立4组原位胰腺移植模型。每组12例,共48例。A组:对照组、B组:PD-L1Ig组、C组:1,25（OH）2D3组、D组:PD-L1Ig+1,25（OH）2D3组;观察术后各组血糖变化,移植物存活以及组织病理学改变;流式细胞检测受体血、脾以及移植胰CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD25+T细胞表达水平;ELISA检测移植物局部IL-2、4、10、12表达水平;结果:与A组相比,PD-L1Ig组并未显著延长移植胰腺存活时间（P＞0.05）,C组、D组对改善血糖水平和延长移植胰腺存活时间作用明显（P＜0.01）,其中,D组移植胰腺存活时间最长（23.9±0.8天）;与A组相比:B组无明显改善,C组排斥反应较A组明显减弱,而D组几乎未发生排斥反应;CD3+CD8+T细胞计数D、C、B与A组相比均有减少,差异有统计学意义（P＜0.01）。CD4+T细胞D、C、B与A组的差异有统计学意义。CD4+CD25+调节性T细胞A、B、C、D组逐渐升高,有统计学意义（P＜0.01）,且以D组较为明显（C组VS A组P＜0.01）;D组明显抑制移植物局部Th1型细胞因子IL-2、IL-12的产生,显著提高Th2型细胞因子IL-4、10的水平;结论:共刺激阻断剂PD-L1Ig联合1,25（OH）2D3可有效抑制细胞免疫应答,干预急性排斥反应,显著延长大鼠移植胰腺存活时间。