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目的:建立由神经毒素6-OHDA诱发的帕金森大鼠模型，利用高效液相色谱-电化学(HPLC-ECD)联用检测aFGF对帕金森大鼠脑神经递质的影响，以及用westernblot和免疫组化检测酪氨酸羟化酶(TH)和内质网应激相关蛋白的表达水平，来初步探讨aFGF对帕金森病的保护作用机制。
方法:1）利用脑立体定位仪定位大鼠脑右侧纹状体，注射6-OHDA制作单侧PD动物模型，并且设置正常组(Sham)、模型组(PD)和aFGF给药组(PD+aFGF)，以及通过APO诱导行为学来判断模型成功率和aFGF对PD大鼠的行为学影响;aFGF给药方式为尾静脉注射;然后采用HPLC-ECD检测大鼠脑纹状体组织中的单胺类神经递质及其代谢产物含量;HE染色观察造模后纹状体的损伤和给药后的形态变化;western-blot检测纹状体中TH含量、内质网应激相关蛋白(Caspase-12、GRP-78和CHOP)和α-synuclein含量的变化;免疫组化检测黑质中TH含量、内质网应激相关蛋白含量和α-synuclein含量的变化。
2)HPLC-ECD检测单胺类神经递质及其代谢产物色谱条件的优化:采用AglientXDB-C18柱，流动相为pH=3.0的0.1 mol/L H3PO4-NaH2PO4缓冲液与甲醇的混合液(91∶9，V/V)，流速为0.3 mL/min，电化学检测的工作电极为玻碳电极，工作电位为0.55V。
结果:1）利用6-OHDA成功地建立了帕金森大鼠模型，且APO诱导行为学验证了其造模成功率达到了75.8％，并且在aFGF给药后，帕金森大鼠的转圈数有一定程度的下降，表明PD症状有所改变。2）HPLC-ECD联用检测大鼠脑纹状体中神经递质DA、DOPAC、HVA、NE、E、5-HT和5-HIAA的含量，结果显示aFGF给药组的神经递质含量明显高于模型组，而低于正常组。3）HE染色可以观察到大鼠脑纹状体造模的损伤部位，且在aFGF给药后纹状体的组织形态得到了明显地修复。4）western-blot检测的纹状体中的TH和内质网应激相关蛋白（Caspase12、GRP78和CHOP），以及α-synuclein的表达量结果为:①aFGF给药组TH含量明显高于模型组，而低于正常组;②aFGF给药组的内质网应激相关蛋白的含量低于模型组，而高于正常组;③aFGF给药组α-synuclein的表达量低于模型组，而高于正常组。免疫组化检测黑质中的TH和内质网应激相关蛋白以及α-synuclein的表达量和纹状体中的同种蛋白的含量变化趋势一致。5）western-blot检测大鼠脑纹状体内P-ERK/ERK、P-AKT/AKT在经过PD造模后被激活，而经过aFGF给药后被进一步激活。
结论:aFGF能有效提高帕金森动物模型脑内纹状体中单胺类神经递质的含量，并且在一定程度上改善了PD的症状。aFGF对6-OHDA造模后的纹状体组织形态也有修复作用，并且提高了黑质-纹状体通路中TH的含量，同时激活了P-ERK/ERK、P-AKT/AKT信号通路，抑制了内质网应激相关蛋白（Caspase12、GRP78和CHOP）和α-synuclein的表达。我们推断其可能的机制是aFGF通过调节GRP-78、CHOP和Caspase12的含量和激活P-ERK/ERK、P-AKT/AKT信号通路，抑制内质网应激的发生，阻止了细胞凋亡并且修复细胞使其恢复正常生理功能，进而提高了TH的表达，神经递质的合成增加，最终使PD的症状得到改善。本论文为PD治疗的新药设计和开发提供初步的实验依据和理论分析。