论文部分内容阅读
目的:(1)调查苯作业工人外周血象状况及影响工人白细胞水平的因素，为更好保护苯作业工人健康提供建议和对策。(2)筛选苯作业工人血浆差异表达microRNA(miRNA)，并进行靶基因预测及生物信息学分析，探讨血浆miRNA在苯引起工人职业健康损伤中的潜在作用。(3)检测低浓度苯作业工人外周血象及尿中反反式粘糠酸(tt-MA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)浓度，探讨低浓度苯接触是否引起工人健康损害及尿中代谢产物浓度改变，为筛选苯的暴露及早期效应标志提供依据。 方法:(1)对1172名调查对象（高浓度组256人，低浓度组574人，对照组342人）进行血常规检查和问卷调查，采用趋势x2检验或Fisher确切概率法进行构成比及率的比较，采用单因素方差分析检验各因素对白细胞计数的影响，采用有序多分类logistic逐步回归分析白细胞减少的危险因素。(2)提取血细胞降低、血细胞波动及正常苯作业工人和不接苯工人血浆RNA，进行微阵列芯片分析获得差异表达的miRNAs，选取四个差异表达miRNAs进行实时定量PCR(RT-qPCR)验证。应用Targetsean、Pictar及miRanda等三个软件预测14个差异显著且信号值较大的miRNAs的潜在靶基因，然后利用David6.7在线平台作基因本体论(GO)和KEGG通路分析（pathway analysis）。(3)对256名低浓度接苯工人和155名不接苯工人进行血常规检查和问卷调查，采集班末尿，利用高效液相色谱-串联质谱法(HPCL-MS/MS)测定作业工人尿中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和反反式粘糠酸（tt-MA）浓度，使用SPSS13.0统计软件对数据进行统计分析。 结果:(1)随着苯接触浓度和工龄增加，工人白细胞异常率升高(P＜0.01);随着苯接触浓度增加，工人白细胞波动率及降低率升高(P＜0.01);不同苯接触浓度、性别、工龄、吸烟及饮酒情况工人白细胞计数有差异(P＜0.05);苯浓度升高、工龄延长、年龄≥45岁、工作场所空气中存在甲醛等化学毒物及居住环境存在严重污染项目是苯作业工人白细胞计数减少的危险因素，吸烟使白细胞计数升高。(2)微阵列芯片筛查出四组间差异表达miRNAs有136个，聚类分析结果显示差异表达miRNAs中有三类比较显著的表达模式。miR-638经RT-qPCR验证，与芯片结果一致，且相对于对照组及正常组，在血细胞降低组miR-638显著上调。对14个差异显著且信号值较大的miRNAs进行潜在靶基因预测，共得到438共同靶基因。经GO生物学过程分析发现25个预测靶基因涉及造血作用、血细胞活化、增殖及分化。由David6.7预测的靶基因富集明显的通路有18条，其中Focal adhesion、Cytokine-cytokine receptor interaction、MAPK signaling pathway及Chemokine signaling pathway等通路与慢性苯毒性关联较紧密。(3)低浓度苯作业工人与对照工人血常规指标存在显著性差异，尿中tt-MA含量差异存在统计学意义(P＜0.01);白细胞计数与接苯工龄及尿中tt-MA、8-OHdG浓度存在负相关关系。 结论:(1)白细胞计数是苯作业工人较敏感的血液毒性效应指标，苯接触浓度增加、工龄延长、年龄≥45岁、工作场所空气中存在甲醛等化学毒物及居住环境存在严重污染项目可增加苯作业工人白细胞计数减少的危险性，吸烟使白细胞计数升高。(2)血细胞降低组、血细胞波动组、正常组及对照组间存在多个差异表达miRNAs，并具有明显聚类表达模式。生物信息学分析表明差异表达miRNAs有成百个潜在靶基因，涉及多个生物学过程，包括造血作用和血细胞活化、增殖及分化;也涉及多条生物学通路，其中有的通路已被报道与苯毒性密切相关。(3)低浓度苯接触可引起工人外周血细胞计数降低，低浓度苯接触尿tt-MA浓度增高。