猴脑常温不同缺血时限下选择性超深低温对Caspase-3、bc1-2和Bax影响的实验研究

来源 :昆明医学院 | 被引量 : 1次 | 上传用户:sheme2002
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【目的】观察猴脑常温缺血0分钟、10分钟、15分钟、20分钟后进行选择性脑超深低温断血流复苏对Caspase-3、bcl-2和Bax蛋白表达的影响,以了解脑缺血后选择性超深低温复苏对猴神经细胞的影响,探讨猴脑常温缺血复苏的极限时间。【方法】健康成年恒河猴15只,雄性,随机分为四组,0分钟组(双侧颈动脉阻断立即超深低温灌注组,简称0分钟组,n=4),10分钟组(双侧颈动脉常温阻断10分钟超深低温灌注组,简称10分钟组,n=4),15分钟组(双侧颈动脉常温阻断15分钟超深低温灌注组,简称15分钟组,n=4),20分钟组(双侧颈动脉常温阻断20分钟超深低温灌注组,简称20分钟组,n=3)。右侧颈内动脉远心端插管连接冷灌注系统,右侧颈内静脉远心端及双侧股静脉近心端插管连接超滤复温装置,建立脑局部体外循环。夹闭双侧颈外动静脉、左侧颈内动静脉常温缺血后向右侧颈内动脉注入4℃林格氏液,维持脑温≤16℃约60分钟。手术前后行头颅MRI检查,术后行神经功能缺失评分。实验猴灌注或复苏死亡后立即开颅取脑,长期存活猴饲养到术后4周处死开颅取脑。免疫组织化学法检测猴额叶神经细胞Caspase-3、bcl-2和Bax蛋白的表达水平。【结果】0分钟组(n=4)、10分钟组(n=4)安全复苏并长期存活,术中、术后血流动力学稳定,术后头颅MRI检查未见异常,术后神经功能评分无异常。15分钟组(n=4)长期存活2只,重残1只,死亡1只。20分钟组(n=3)于灌注后未能安全复苏,全部死亡。免疫组化结果表明:20分钟组及15分钟组与0分钟组比较Caspase-3的表达增高(P<0.05),0分钟组、10分钟组、15分钟组、20分钟组4组间相互比较,Bax的表达逐渐增高(P<0.05),0分钟组、10分钟组、15分钟组三组间猴额叶Bcl-2表达无明显差异,各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。20分钟组较其余三组猴额叶Bcl-2的表达明显降低,有统计学意义(P<0.05)。【结论】(1)灵长类动物恒河猴可以在单侧颈内动脉冷灌注的条件下迅速达到脑选择性超深低温(14.3-16℃)。(2)常温下阻断猴双侧颈内动脉血流0分钟、10分钟行脑选择性超深低温灌注60分钟后可安全复苏并长期存活,对血流动力学、脑组织及神经功能无明显影响,超深低温具有明显脑保护作用。(3)常温下缺血15分钟行选择性超深低温复苏是可能的,但实验猴死残率高。20分钟常温脑缺血后低温灌注,脑缺血对神经元破坏,出现不可逆性脑损伤,导致复苏无效。(4)脑常温缺血后低温复苏的黄金时间可能就为10分钟。15分钟缺血后低温复苏虽有可能挽救生命,但神经功能缺失及死残率均较高,存在较大复苏风险。
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