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β-内酰胺类抗生素是指化学结构中含有β-内酰胺环的一类抗生素,主要包括青霉素类和头孢菌素类,其作用特点是能够抑制细菌黏转肽酶的活性,从而阻止细菌细胞壁的合成,呈现杀菌活性。在动物生产中,β-内酰胺类抗生素广泛用于控制奶牛的乳房炎,治疗动物尿道、胃肠道和呼吸道感染等。但由于其使用方法不当或不遵守休药期规定等原因,均可造成它在畜产品中的残留,给人类健康带来严重危害,如产生过敏反应、破坏胃肠道菌群平衡和增强细菌耐药性等。本文分别以头孢氨苄、7-ACA、头孢羟胺苄、头孢噻肟、头孢噻吩、头孢噻呋为半抗原用不同的方法与蛋白偶联得到6种免疫原。每种免疫原免疫两只兔子,经过一次初免,3-5次复免后得到相应的多克隆抗体。然后采用间接ELISA测定效价,抑制率筛选出具有簇特异性的多克隆抗体。其中头孢氨苄-BSA为免疫原所得到的抗体具有较高效价,达到200000.对头孢氨苄、头孢羟氨苄的50%抑制率(IC50)分别为1.5、2.6 ng/mL。另外,头孢噻呋-KLH为免疫原的抗体具有较强的特异性,对其他头孢类抗生素交叉反应率小于10%,IC50值为10 ng/mL。以头孢氨苄-BSA为免疫原所得多克隆抗体为研究对象建立间接竞争ELISA(icELISA)和胶体金免疫层析(ICA)方法。两种方法均能实现对多种头孢类抗生素的多残留检测。其中ELISA试剂盒对头孢氨苄、头孢羟胺苄检测限在0.5-5.6ng/mL之间。胶体金免疫层析法通过对最佳标记量、重悬液、垫处理液、金标点样量,包被原包被量等条件的优化,对头孢氨苄,头孢羟氨苄的检测限达到10 ng/mL.对头孢氨苄,头孢羟氨苄在牛奶样本中的添加回收率在71-98%之间,变异系数最大为11.6。试纸条可在2-8℃保存至少三个月。测定40个样品,与ELISA做对照,结果证明有较好的相关性。综上所述,本研究在成功获得具有头孢类抗生素簇特异性的多克隆抗体的基础上,成功研制了可以实现多残留检测的ELISA试剂盒和ICA试纸条。两种方法都具有方便、快速、便携的特点能够实现现场的筛选需要,为更好的监测头孢类抗生素的残留提供有效的技术支持。