意义：超声促进基因转化或转染是一种新兴的方法，超声介导转化具有生物损害小、操作方法简便等优点，在医疗生物学科方面备受关注。同时，超声转化可以在同一实验条件下完成大样本的实验，在工业生产中也具有其独特的优势。目前，超声介导基因转化的研究主要集中在革兰阴性杆菌，如大肠杆菌、具核梭杆菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌，且对转化条件的研究多为单一指标观察。　　本文选用基因转化中最常用的革兰氏阴性杆菌大肠杆菌 DH5α和细胞壁结构特殊的耻垢分枝杆菌作为基因转化的受体菌，通对超声介导基因转化进行多指标对比研究，希望建立低频低强度超声（Low-frequency and Low-intensity Ultrasound,LFLIU）介导质粒DNA转入细菌便捷、高效、安全的方法。在未来的发展中，超声促进基因转化可能是成为一种有前途的基因治疗的辅助技术。　　目的：探讨不同剂量的LFLIU，以及LFLIU联合微泡等，介导质粒转入不同细菌的转化效率的影响，以及在基因和蛋白水平观察LFLIU辐照后对目的基因ClpP2表达情况的影响。　　方法：　　1.LFLIU介导质粒转入大肠杆菌的效果观察：用42kHz超声辐照大肠杆菌DH5α和质粒 DNA混合液，实验条件分别为：　　（1）以0.5mmol/L CaCl2溶液为超声介质，采用0.13W/cm2超声分别连续超声辐照0s、20s、40s、80s、160s、320s；　　（2）分别以无菌生理盐水（不含有Ca2+）、0.5mmol/L CaCl2、1mmol/L CaCl2、5mmol/L CaCl2、10mmol/L CaCl2溶液为超声介质，采用0.51W/cm2超声辐照连续辐照160s；（3）以0.5mmol/L CaCl2溶液为超声介质，连续超声辐照160s，超声辐照强度分别为0W/cm2、0.13W/cm2、0.35W/cm2、0.51W/cm2、0.72W/cm2。观察指标：（1）比较不同实验条件对质粒转化效率的影响；（2）琼脂糖凝胶电泳检测不同声强对质粒构型的影响；（3）流式细胞仪检测不同声强对大肠杆菌存活率的影响。　　2.LFLIU联合微泡促进质粒转入耻垢分枝杆菌的效果观察：用40kHz、0.27W/cm2超声辐照耻垢分枝杆菌和外源物质混合液，Sonovue?微泡浓度分别为：0mg/ml、1.25mg/ml、2.5mg/ml、3.75mg/ml，LFLIU联合Sonovue?辐照的时间分别为：0min、3min、5min、10min、20min。实验后观察：　　（1）比较不同条件下质粒的转化效率；　　（2）菌落计数法检测不同条件对耻垢分枝杆菌存活率的影响；　　（3）共聚焦显微镜观察LFLIU辐照后转入细菌的Dextran-FITC荧光情况；　　（4）扫描电镜观察超声辐照后耻垢分枝杆菌的显微结构；　　（5）q-PCR与Western blot分析分别在基因水平和蛋白水平，鉴定LFLIU辐照后对目的基因ClpP2表达情况影响。　　结果：　　1.LFLIU能够介导质粒转入大肠杆菌DH5α及耻垢分枝杆菌，并在抗性培养板上筛选出阳性菌株，其质粒的转化效率与超声辐照强度、超声辐照时间、CaCl2介质的浓度有一定关系。　　2.当LFLIU联合Sonovue?作用于耻垢分枝杆菌时，质粒的转化效率最高为19.33×102CFU/μgDNA，是单独超声作用下的19倍。　　3.电泳检测结果显示，随着超声辐照剂量的增强对质粒的构型有一定影响，在声强为0.72W/cm2对质粒构型的影响最为严重，可见超螺旋质粒结构变成开环状态，但不影响其结构的完整性。　　4.扫描电镜观察示单独超声辐照后细菌损伤较小，超声联合微泡后对超声有一定损伤，造成细菌肿胀、细胞壁断裂，菌体液化死亡等。　　5.q-PCR结果显示在LFLIU辐照10min后，可见ClpP2可以成功表达。Western blot分析结果显示LFLIU辐照后的阳性克隆可以成功表达目的基因ClpP2编码的蛋白。　　结论：LFLIU能够介导质粒转入细菌，LFLIU联合微泡能显著提高质粒的转化效率。随着LFLIU辐照强度的增加，导致质粒构型改变，但不影响其结构的完整性。LFLIU辐照后目的基因ClpP2在基因水平和蛋白水平能够成功表达。