滇重楼茎叶总皂苷抑制白血病K562细胞分子机制的研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:rudy_luo
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[目的]探讨从滇重楼地上部分中提取的滇重楼茎叶总皂苷抑制白血病细胞株K562的分子作用机制。[方法]①:滇重楼茎叶总皂苷处理K562细胞株并设立实验组和对照组②:收集细胞,提取细胞总RNA,搜索人β-catenin基因及β-actin基因(?)nRNA全长序列,设计引物,以Trizol法提取总RNA,逆转录,SYBR法real-time PCR检测人β-catenin基因mRNA水平相对表达差异,实验以人内参基因β-actin为对照,每样品进行3次平行实验重复,每次检测设置3个复孔③收集细胞,提取总蛋白,以BCA法测定蛋白浓度,蛋白进行SDS-PAGE,转膜,抗人β-catenin抗体孵育,二抗孵育,ECL显色,压片曝光,拍照记录结果,分析人β-catenin蛋白水平相对表达差异,实验以人内参P-actin蛋白为对照,每样品进行3次平行实验重复。[结果]①分别用0.625μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml浓度的滇重楼茎叶总皂苷处理人白血病细胞K562细胞株24h,β-catenin mRNA相对于对照组的相对表达量分别为0.88±0.081(P为0.203)、0.65±0.106(P为0.051)、0.574±0.064(P为0.047)、0.41±0.056(P为0.042),在2.5μg/ml、5μg/ml剂量之间差异具有统计学差异(P<0.05);柱状图可直观的表现出滇重楼茎叶皂苷对β-catenin的抑制与剂量呈正相关性;②分别用0.625μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml浓度的滇重楼茎叶总皂苷处理人白血病细胞K562细胞株24h,β-catenin蛋白相对于对照组的相对表达量分别为0.47±0.075(P为0.810)、0.38±0.020(P为0.318)、0.32±0.070(P为0.042)、0.27±0.006(P为0.031),与PCR结果相同在2.5μg/ml、5μg/ml剂量之间差异具有统计学差异(P<0.05),但是在1.25μg/ml剂量组中结果与PCR结果有所不同,β-catenin相对于0.625μg/ml剂量组不但没有下降反而有所上升,柱状图表现出除了1.25μg/ml剂量组外滇重楼茎叶皂苷对β-catenin的抑制与剂量呈相对的正相关性。[结论]滇重楼茎叶总皂苷对白血病细胞株K562有一定的抑制作用,滇重楼茎叶总皂苷可能通过抑制K562细胞中β-catenin mRNA和蛋白水平的表达,可能抑制Wnt信号通路,进而抑制白血病细胞的增殖和生长,促进凋亡。
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