实验室一般采用差速离心和密度梯度离心的方法来纯化病毒,这种方法在工业上难以大量推广。而人用疫苗的纯化则多采用超滤,层析等方法,由于成本较高,在兽用疫苗上很难普遍采用。本研究借鉴蛋白质提纯的相关方法,利用硫酸胺、冷乙醇和PEG6000对鸡新城疫病毒进行了初步提纯,并用红细胞血凝实验对浓缩效果进行了检测,结果发现终浓度为40%时硫酸铵对鸡新城疫病毒的浓缩效果最好,可将病毒的血凝效价提高32倍;在冷乙醇终浓度为30%时对病毒的浓缩效果最好,可以将病毒的血凝效价提高8倍;PEG6000的终浓度为20%时对鸡新城疫病毒的浓缩效果最好,可将病毒的血凝效价提高16倍。本研究结果给兽用疫苗的纯化提供了一定的借鉴意义。新城疫是由新城疫病毒引起的禽类的一种急性、高度接触性传染病,在世界范围内均被认为是家禽和鸟类最重要的两大疾病之一。目前鸡新城疫尚无有效的治疗药物,疫苗接种是控制其爆发的主要手段,其中基因工程疫苗具有广阔的发展前景。同时鸡新城疫病毒的相关单克隆抗体己广泛用于病毒抗原表位和发病机理,疫病诊断和流行病学分析等各项研究中。本研究选取了鸡新城疫病毒标准中国强毒株F48E9 HN基因中基本上包含了其主要抗原位点的两个基因片段,通过RT-PCR技术,成功地获得了这两个不交叉的基因片段,长度分别为790bp和579bp。而后将这两段基因分别克隆到了pGEM-T vector中,经PCR和酶切鉴定后进行测序,测序结果表明这两段基因已经成功地克隆到了pGEM-T vector中。克隆出的两个HN基因片段HN1、HN2与原核表达系统pET-28a(+)进行了连接,成功地构建了重组表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了表达;由于pET-28a(+)表达载体在起始密码子之后有His(Tag)标记,表达的目的融合蛋白N端含有His,能与Ni柱中的Ni2+结合,而其它蛋白不能结合在Ni柱上,所以利用Ni亲和层析柱对表达的目的蛋白进行了纯化,通过SDS-PAGE电泳检测,检测出了经过纯化的目的蛋白。本研究中得到的两个HN蛋白为进一步进行鸡新城疫病毒的相关单克隆抗体研究和基因工程疫苗研究打下了基础。