论文部分内容阅读
目的：本研究通过慢病毒技术上调鼻咽癌细胞6-10B的HSP70-2基因的表达和异黄酮类药物ZSGS-4下调鼻咽癌细胞6-10B和5-8F的HSP70-2基因的表达，探索HSP70-2基因对鼻咽癌细胞增殖的影响。方法：一方面应用慢病毒技术，构建pLV-HSP70-2-IRES/eGFP-Neo目的慢病毒载体和pLV-CMV-eGFP-Neo空载慢病毒载体，分别获得目的慢病毒和空载慢病毒转导的6-10B细胞稳转株，即6-10B-HSP70-2/eGFP细胞（目的基因组）和6-10B-blank/eGFP细胞（空载对照组），上调6-10B细胞HSP70-2基因表达。另一方面应用黄酮类药物ZSGS-4下调鼻咽癌细胞6-10B和5-8F的HSP70-2基因表达。继而应用Western blotting检测hsp70-2蛋白表达水平；CCK8检测细胞生长曲线；流式细胞仪检测细胞周期和凋亡状况。结果：首先构建了pEntry221-HSP70-2-IRES/eGFP入门载体，再应用LR反应构建了pLV-HSP70-2-IRES/eGFP-Neo目的慢病毒载体和pLV-CMV-eGFP-Neo空载慢病毒载体，再运用慢病毒4质粒包装系统成功包装出目的慢病毒和空载慢病毒，分别转导6-10B细胞后经G418筛选出各自的单克隆细胞，利用Western blotting方法检测各组细胞hsp70-2蛋白表达水平，即6-10B-HSP70-2/eGFP细胞组与6-10B-blank/eGFP细胞组或与6-10B细胞组比较，hsp70-2蛋白表达量升高75.31±3.54%（P<0.01）或75.13±3.36%（P<0.01），验证了6-10B-HSP70-2/eGFP和6-10B-blank/eGFP细胞稳转株。6-10B-HSP70-2/eGFP细胞、6-10B-blank/eGFP细胞和6-10B细胞分别培养24h、48h和72h后，6-10B-HSP70-2/eGFP细胞与6-10B-blank/eGFP细胞比较，细胞增殖率分别升高29.18±0.014%（P<0.01）、81.72±0.124%（P<0.001）和41.84±0.004%（P<0.001）；与6-10B细胞比较，细胞增殖率分别升高25.69±0.031%（P<0.01）、84.53±0.060%（P<0.001）和45.28±0.044%（P<0.001）。6-10B-HSP70-2/eGFP细胞、6-10B-blank/eGFP细胞和6-10B细胞分别培养24h后，6-10B-HSP70-2/eGFP细胞与6-10B-blank/eGFP细胞比较，增殖指数（PI）和S期细胞比率（SPF）分别增加73.31±5.882%（P<0.001）和71.09±7.495%（P<0.01）；与6-10B细胞比较，PI和SPF分别增加72.60±1.300%（P<0.001）和69.29±13.42%（P<0.01）。细胞凋亡百分比，各组间相比无明显变化（P>0.05）。另一方面，应用不同浓度的异黄酮类药物ZSGS-4（0μg/mL、10μg/mL、12.5μg/mL、15μg/mL和17.5μg/mL）分别处理6-10B和5-8F细胞12h。各实验组与对照组比较，hsp70-2蛋白的表达水平明显降低（p<0.05）；细胞抑制率明显增强（p<0.05）；G0/G1期和S期DNA含量明显降低（p<0.05）；subG0/G1期和G2/M期DNA含量明显升高（p<0.05）；细胞凋亡率明显升高（p<0.05）。结论：本研究通过上调鼻咽癌细胞6-10B的hsp70-2蛋白表达，促进其生长增殖；而下调鼻咽癌细胞6-10B和5-8F的hsp70-2蛋白表达，抑制其生长增殖和促使其凋亡。