论文部分内容阅读
目的:以人胃癌MGC-803细胞为研究对象,观察双氢青蒿素与紫杉醇对该细胞增殖和凋亡的影响,以初步探讨两药联合是否能起到协同作用,从而为胃癌的化疗提供新思路。方法:体外培养MGC-803细胞,采用CCK-8法于24h分别检测不同浓度双氢青蒿素、紫杉醇及两药联合对细胞增殖的影响,并用CHOU-Talalay法评估两药联合的效果;用流式细胞仪分析各药物组对细胞周期阻滞的影响;用AO/EB染色剂处理细胞后,在荧光显微镜下观察各药物处理组作用MGC-803细胞后的凋亡情况;用逆转录聚合酶链反应法和免疫蛋白印迹法检测对人胃癌MGC-803细胞的Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响。结果:1、双氢青蒿素(191.082、955.410、4777.048、23885.240、119426.202ng/ml)、紫杉醇(2.4、12、60、300、1500ng/ml)及两药联合(191.082+2.4、955.410+12、4777.048+60、23885.240+300、119426.202+1500ng/ml)对人胃癌MGC-803细胞均具有增殖抑制作用并呈浓度依赖(p<0.05);联合用药组的增殖抑制作用优于单一用药组(p<0.05),其中两药小剂量联合用药时呈协同作用,大剂量联合用药时呈拮抗作用。2、通过流式细胞仪对药物处理后细胞的周期检测,我们发现双氢青蒿素(955.410ng/ml)作用后出现G0/G1期、S期细胞阻滞(p<0.001),紫杉醇(12ng/ml)作用后出现G2/M期细胞阻滞(p<0.001),两药联合(DHA955.410ng/ml+PTX12ng/ml)表现出S期、G2/M期阻滞(p<0.001);联合用药组相比于紫杉醇用药组有G2/M期细胞阻滞减少(p<0.001)。3、荧光显微镜观察发现,双氢青蒿素(955.410ng/ml)、紫杉醇(12ng/ml)处理MGC-803细胞24h后出现较多橙黄及橙红色细胞,相比于绿色细胞而言,体积缩小、胞质浓缩,具有凋亡细胞的明显特征。同样条件下,联合组的凋亡细胞数较单药组明显增多,且晚期凋亡细胞数目居多。4、双氢青蒿素(955.410ng/ml)及紫杉醇(12ng/ml)作用于人胃癌MGC-803细胞后均能促进Bax、Caspase-3的表达,抑制Bcl-2的表达,而两药联合(DHA955.410ng/ml+PTX12ng/ml)表现出更明显的效果,差异均有统计学意义(p<0.05)。结论:1、双氢青蒿素、紫杉醇对人胃癌MGC-803细胞的增殖抑制呈浓度依赖;2、两药联合对MGC-803细胞有增殖抑制作用,它们合用时小剂量是协同作用,而大剂量则为拮抗作用;3、两药均可通过增加Bax、Caspase-3的表达及减少Bcl-2的表达来诱导细胞凋亡。