SWRG为临床经验方,主要用于治疗肝纤维化疾病,疗效确切。本文基于前期研究,展开SWRG进行体内过程研究,探讨其保肝护肝作用机理,为临床进一步研究提供科学支撑。一、文献研究该部分对中药复方药代动力学、肝纤维化疾病现代研究、肝脏代谢组学和SWRG药味化学成分进行系统性综述。二、配伍对SWRG有效组分正常大鼠体内药动学研究(一)配伍对丹参有效组分体内药动学研究复方配伍就是有效组分以一定的比例进行配伍。SWRG丹参药味同时含有丹参酮类和丹酚酸类成分,本章节基于药动学角度研究两类成分之间的相互作用,为复方SWRG整体优化和精制提供理论依据。建立UPLC-TQ/MS同时测定大鼠血浆七种成分分析方法,包括四种丹酚酸类(丹酚酸B、丹参素、迷迭香酸和原儿茶醛)和三种丹参酮类(丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和丹参酮ⅡA),并研究两者相互作用对7种成分药动学参数影响。结果表明,丹酚酸类显著影响丹参酮类大鼠体内药动学参数,显著提高丹参酮ⅡACmax和生物利用度;延迟丹参酮IT1/2,降低其体内代谢速度,推迟达峰时间,但抑制Cmax,对其整体生物利用度无显著影响;隐丹参酮生物利用度配伍丹酚酸类后显著降低,推测丹酚酸类成分促进隐丹参酮生物转化。丹参酮类共存成分显著降低丹酚酸B生物利用度,推测丹参酮类成分能够促进丹酚酸B降解为丹参素,丹参素的生物利用度显著提高。迷迭香酸是丹酚酸B的主要代谢产物,而共存丹参酮成分使丹酚酸B降解加速,其代谢产物迷迭香酸减少,迷迭香酸AUC0～T降低,共存成分对原儿茶醛药动学参数无显著性差异。同时将丹参有效组分作为整体研究对象,比较丹参共存成分和SWRG配伍对有效组分的影响,结果表明,丹酚酸B和迷迭香酸在丹参单味药中AUC0～T显著提高,配伍后显著减少,推测配伍后黄芪和姜黄中成分抑制了其吸收;而对于迷迭香酸,丹参共存成分和配伍均抑制其吸收;对于原儿茶醛,丹参共存成分无显著性差异,配伍后能够显著提高生物利用度。丹参酮类成分则配伍和共存成分均能够提高其生物利用度。(二)配伍对姜黄有效组分体内药动学研究姜黄中姜黄素类成分为SWRG功效物质基础,因此本节按“组分群-单味药-复方”主线研究思路,基于药代动力学角度,探讨姜黄共存成分和SWRG配伍对有效组分群吸收影响。建立UPLC-TQ/MS方法测定大鼠血浆中姜黄素和双去甲氧基姜黄素含量,结果表明姜黄共存成分和SWRG配伍对双去甲氧基姜黄素体内生物利用度无显著影响。姜黄共存组分能够显著增加姜黄素AUC0～T;姜黄素类组分群配伍丹参、黄芪后结果提示,姜黄素生物利用度显著提高。现代研究表明姜黄素单体生物利用度较差,主要提高途径为长链脂质体等,本研究为姜黄素类成分体内生物利用度提高提供依据,同时为临床新药的研究提供参考。三、基于肝纤维化模型探讨SWRG保肝护肝作用机制(一)SWRG有效组分在正常和CCl4肝纤维化模型大鼠体内药动学和组织分布研究本章复制经典CCl4肝纤维化模型大鼠,采用灌胃CCl4方式连续造模2个月,筛选出合适的肝纤维化模型大鼠,随机分为5组(药代动力学模型组和组织分布模型组),每组6只,正常SD大鼠同等分组。利用UPLC-TQ/MS测定大鼠血浆、心、肝、脾、肺、肾、脑和胸腺中丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、芒柄花素、芒柄花苷、姜黄素和双去甲氧基姜黄素的含量。比较模型组和正常组药代动力学参数,结果表明,病理状态下9种有效成分药动学参数均发生改变。芒柄花苷和芒柄花素AUC0～T显著增加,毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮苷AUC0～T无显著差异,而Cmax和T1/2则出现显著性差异。丹参酮Ⅰ的AUC0～T显著降低,而丹参酮ⅡA和隐丹参酮显著增大;姜黄素生物利用度差异无显著性差异,而双去甲氧基姜黄素生物利用度显著提高。通过药动学比较,揭示当肝脏病变,代谢能力下降,体内物质代谢可能被抑制,使得药物在血浆中富集,发挥药效。测定模型组和正常组中大鼠5min、30min、60min和240min各组织有效成分含量,比较表明各成分主要分布于肝脏、肺、肾和脾等器官,且肝脏中含量相对较高,病理状态下SWRG有效成分在肝脏富集,有助于疾病治疗;同时发现大鼠肺部药物富集仅低于肝脏,病理状态下含量较高,提示我们SWRG可能对肺部疾病存在潜在治疗效果。(二)基于代谢组学研究SWRG保肝护肝机制复制经典CCl4大鼠肝纤维化模型,设置空白组、模型组和给药组,按照临床给药剂量和服用周期,连续给药45天,每隔15天对各组大鼠采集血浆和尿液,并于最后一次给药后取血浆和肝脏组织进行病理学检查,测定大鼠ALT、AST、HA和肝组织中Hyp含量。结果表明,服用SWRG一个周期后,大鼠血浆各个指标和病理状态呈现恢复趋势。运用超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术,对各组大鼠血浆和尿液内源性代谢物进行测定,采用监督模式识别方法正交信号矫正结合偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对多变量数据进行分析。代谢组学研究结果表明,正常组与模型组之间具有显著性差异的的主要内源性代谢物有溶血磷脂、胆汁酸、肌酸、高瓜氨酸等,主要的代谢通路包括初级胆汁酸生物合成、脂质代谢、能量代谢等,结果表明SWRG干预治疗肝纤维化大鼠,能够使其紊乱的代谢不同程度的恢复,揭示了其可能发挥作用而调节的代谢通路。