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研究目的:在课题研究前期,我们通过大量文献学习,发现USP6在多种恶性肿瘤组织中存在异常表达,并且通过Wnt、NF-KB等细胞信号通路参与多种恶性肿瘤的发生、侵袭转移过程。但USP6在结肠癌中的表达水平及在结肠癌进展过程中所发挥的作用仍不清楚。本研究目的在于探索USP6在结肠癌中的表达水平、作用机制以及临床意义,为预测结肠癌治疗寻找新的靶点及预后判断寻找新的生物标志物。方法:我们首先通过查询Oncomine website数据库,查询USP6在正常结肠组织及结肠癌组织中的表达情况,同时我们应用quantitative Real Time PCR和Western Blot技术分别检测USP6在收集的30例结肠癌组织中及其癌旁正常结肠组织中的表达量。通过分析USP6与临床病理参数的关系,应用COX比例风险回归模型进行单因素变量分析和多因素变量分析,分析USP6表达与结肠癌侵袭转移的关系。然后我们通过基因敲减和过表达技术分别获得USP6敲减和过表达的结肠癌稳转细胞系,并通过Western Blot、Real Time PCR、CCK8实验、细胞侵袭实验、细胞划痕实验、裸鼠成瘤、裸鼠转移瘤模型、HE染色、免疫组化染色等体内体外实验方法检测USP6对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响。应用Kaplan-Meier法分析USP6的表达水平与结肠癌患者生存概率的关系,绘制结肠癌患者生存曲线。结果:通过Western Blot和qRT-PCR实验,课题组发现在随机选取的30对结肠癌组织样本中,USP6在结肠癌组织中的表达远高于结肠癌旁正常结肠组织。通过单因素及多因素变量分析,我们得出USP6的表达水平与年龄、性别、血管侵犯等无明显相关。USP6的表达水平与肿瘤的大小、病理分期、分级明显呈正相关。USP6的表达水平与肿瘤大小、分期、分级、淋巴转移、远处转移同为影响结肠癌疾病特异性生存期的危险性因素。USP6的表达水平与肿瘤大小、分期、分级、淋巴转移、远处转移同为影响结肠癌疾病总生存期的危险性因素,USP6为影响结肠癌预后的独立危险因素。建立四种结肠癌稳转细胞系HT-29/Vector、HT-29/Lv-USP6、SW620/NC、SW620/siUSP6 后,我们通过 CCK8 实验证明,USP6明显的促进了结肠癌细胞的增殖能力;通过细胞侵袭实验证明:USP6明显的促进了结肠癌细胞的侵袭能力;通过细胞划痕实验证明,USP6明显增强了结肠癌细胞在体外的转移能力。通过裸鼠成瘤实验证明了 USP6促进了结肠癌细胞的在体内的增殖能力;通过裸鼠转移瘤模型实验,我们明确发现USP促进了结肠癌细胞在体内的侵袭转移。我们应用Kaplan-Meier法对结肠癌患者疾病特异性生存期、总生存期进行分析,得出USP6高表达的结肠癌患者预后明显差于USP6低表达的结肠癌患者。结论:USP6在结肠癌组织中呈现高表达;通过多种体内外实验以及临床数据分析,证明:USP6增强了结肠癌细胞的增殖、侵袭转移能力,USP6在结肠癌侵袭转移过程中发挥重要作用,USP6为结肠癌的独立危险因素,USP6有可能成为判断结肠癌预后的分子标志物以及治疗的新靶点。