目的:非酒精性脂肪性肝病（Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）是除酒精和其他明确的肝损伤因素外所致的,以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要病理特征,与肥胖及胰岛素抵抗紧密相关的代谢应激性肝损伤。NAFLD疾病谱很广,包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎（Nonalcoholic steatohepatitis,NASH）以及进展性肝纤维化、肝硬化甚至肝细胞癌。NAFLD发病机制复杂且临床尚未出现特效治疗药物。鞘氨醇激酶（Sphingosine Kinase,SphK）是催化鞘氨醇磷酸化生成1-磷酸鞘氨醇（S1P）的关键限速酶,它在神经酰胺,鞘氨醇和S1P三者的代谢稳态中处于中心地位。SphK存在两种亚型,即SphK1和SphK2,两者为同工酶。目前,SphK2在肝脏脂质代谢中发挥的作用尚未被完全阐明。因此,本研究旨在揭示肝源性SphK2在高脂饮食（HFD）诱导的小鼠NAFLD中的调控作用以及具体分子机制,对于靶向调控肝脏脂质代谢紊乱,开发新型药物干预靶标提供新见解和新思路。方法:本研究使用高脂饮食（Research Diets,#D12492）喂养野生型（WT）、SphK2肝细胞特异性敲除(SphK2Hep-/-)以及腺相关病毒介导的SphK2过表达小鼠20周以诱导小鼠NAFLD模型。同时,我们使用0.5 mM棕榈酸（PA）处理小鼠原代肝细胞24小时诱导细胞脂肪肝模型。采用脂质代谢组学分析并筛选肝源性SphK2显著影响的差异代谢物。此外,我们使用co-IP、同源建模、分子对接和动力学模拟技术构建蛋白三维结构并观察蛋白相互作用和结合位点。构建过表达标签质粒和SphK2位点突变质粒,并利用体内泛素化实验检测蛋白泛素化水平。结果:与WT小鼠相比,肝细胞敲除SphK2显著加重HFD诱导的肝脏脂质沉积和脂肪变性、肝细胞损伤以及胰岛素抵抗,腺相关病毒介导的SphK2过表达则可明显逆转高脂饮食导致的肝脏脂肪变性和胰岛素抵抗。此外,脂质代谢组学结果表明肝细胞缺失SphK2明显促进HFD诱导的肝脏甘油三酯（TG）堆积。机制上,我们发现,与WT小鼠相比,SphK2Hep-/-小鼠肝细胞中ATGL蛋白表达显著降低,但mRNA水平无明显变化。通过co-IP、体内泛素化实验以及分子对接与动力学模型研究我们首次揭示肝源性SphK2通过其H335与COP1竞争性占位ATGL的VP基序,阻止COP1与ATGL结合,进而抑制ATGL泛素化降解并上调ATGL蛋白表达,继而逆转肝脏脂质代谢紊乱,减轻肝细胞甘油三酯（TG）沉积。结论:肝源性SphK2能与COP1竞争性结合ATGL,进而抑制ATGL的泛素化修饰,加速肝细胞TG水解,从而维持肝脏脂质代谢稳态并延缓NAFLD发生发展。本研究有望揭示维持肝脏脂质代谢稳态的全新分子机制,为SphK2纠正肝脏脂质代谢紊乱改善NAFLD提供全新认识,为开发针对NAFLD的新型药物干预靶标提供重要理论依据。