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本研究以piezo操作系统为技术支撑，在掌握小鼠卵母细胞胞浆内精子注射技术(ICSI)的基础上，进行了ICSI技术生产试管小鼠及转基因小鼠的尝试。实验结果表明1、Piezo系统对小鼠卵膜损伤比较大，DBA♂×C57♀杂交鼠(B6D2 F1)与昆明白(KM)鼠卵在注射后1h的成活率分别只有55.5％和23.3％，操作液中添加3％蔗糖可以明显提高两者ICSI成活率(88.5％vs55.5％P＜0.01，84.5％vs 23.3％P＜0.01)；2、以Hepes-CZB+3％蔗糖做操作液，用来自成年KM鼠附睾尾的新鲜精子头和pEGFP-N1质粒孵育处理冻融精子头，直接注射到B6D2 F1小鼠卵母细胞质中，注射后1h，83.3％的卵母细胞仍然存活，鲜精组和冻精组各有92.3％和83.0％成活卵子排出极体、出现原核。用CZB溶液继续培养ICSI胚胎，两组的卵裂率、桑椹胚率、囊胚率分别为(97.8％vs 94.7％)、(64％vs 64.5％)、(5％，vs 24.7％)。其中桑椹胚率、囊胚率均显著低于体内受精对照组(64％，64.5％vs 88％；5％，24.7％vs70％P＜0.01)；3、随机抽取16枚3.5d冻精ICSI囊胚，紫外灯下检察胚胎发光情况，发现有5枚(31.3％)囊胚显示有GFP表达；4、将鲜精组原核期120枚胚胎和82枚2-cell胚胎及冻精组135枚原核期胚胎移植后移植到同期km假孕母鼠受体内，分别出生28只、3只、18只ICSI小鼠(黑色或灰色)，效率分别为23.3％，4％，13.3％。健康成年的31只ICSI小鼠，没有明显的生理和行为异常。随机抽取六对鲜精组性成熟ICSI小鼠做交配实验，一个月后都有小鼠出生(平均窝产10.7只)。本实验充分表明，ICSI精子载体法可以比较高地制造小鼠转基因胚胎，小鼠附睾新鲜精子及无抗冻剂保护冷冻致死精子都具有足够的全程发育潜力。