无花果蛋白酶的过氧化物模拟酶性质及其分析应用

来源 :西南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jrff1
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
酶是生物有机体进行自我复制和新陈代谢必不可少的生物催化剂。无论是从对应的底物类型还是执行的反应类型来看,他们都是最具特异性的催化剂。在大多数情况下,一种特定的酶只有几种对应的底物,并且对于不同底物执行的是同一反应类型。天然酶由于易变性和降解,来源有限,需要严苛的储存条件,热稳定性低,费用昂贵,易受环境影响以及保存时间短,导致其应用仍然受到诸多限制。因此,目前的研究兴趣大多集中于模拟酶的研究。如:氧化酶的模拟、蛋白酶的模拟、过氧化氢酶的模拟、超氧化物歧化酶的模拟、过氧化物酶的模拟,等等。其中研究最为深入和广泛的是过氧化物模拟酶,至今,越来越多的纳米过氧化物模拟酶被发现或合成,有力地促进了过氧化物模拟酶的发展。但美中不足的是,这些非生物催化剂时常需要复杂的制备过程,并且需要表面修饰以防止团聚,这难免会导致低的重复性和低的催化活性。此外,相比于非生物催化剂,生物催化剂反应条件更加温和,且在良好的生理条件下拥有相当高的催化效率和反应速率。因而,生物型过氧化物模拟酶的开发和研究仍然不可或缺。本文发现无花果蛋白酶不仅具有蛋白酶性质还具有过氧化物模拟酶性质。无花果蛋白酶是天然植物蛋白酶,兼顾了生物催化剂和模拟酶的优点,其应用前景非常广泛。基于其过氧化物模拟酶性质,我们实现了一些分析应用:检测细胞中释放的H2O2、检测半胱氨酸以及检测汞离子。(1)我们用足够的证据证明了无花果蛋白酶固有的过氧化物模拟酶性质,无花果蛋白酶可以催化H2O2氧化有机底物(如TMB、ABTS、OPD)发生对应的显色反应。同时,优化了无花果蛋白酶作为过氧化物模拟酶的催化条件(pH、温度、反应时间、底物浓度),设计实验证实了该催化活性在各种情景中的有效性,研究了其催化机理,并与HRP的催化活性作了对比。此外,实验结果显示无花果蛋白酶作为过氧化物模拟酶时的活性位点与其作为蛋白酶是的活性位点不同,说明一种酶可能催化多种类的底物执行不同类型的反应。为进一步深入认识酶的功能提供了新依据。(2)基于无花果蛋白酶的过氧化物模拟酶性质,结合过氧化物酶底物TMB,我们建立了简便、灵敏、实用的比色法检测H2O2,并成功应用于人乳腺癌细胞中释放的H2O2的检测。用无花果蛋白酶的过氧化物模拟酶性质检测H2O2不需要复杂的合成和修饰过程,且绿色环保。无花果蛋白酶实现了H2O2的检测,说明也能用于与H2O2相关的葡萄糖、黄嘌呤、尿酸、肌氨酸、胆碱、乙酰胆碱等的检测。为今后无花果蛋白酶作为模拟酶在免疫分析、生物技术和环境监测中的应用打下基础。(3)我们利用无花果蛋白酶的过氧化物模拟酶性质建立了一种简单、灵敏、绿色的比色法高选择性定量检测半胱氨酸。无花果蛋白酶作为过氧化物模拟酶,能够催化TMB-H2O2的反应。半胱氨酸的引入,竞争了与TMB反应的H2O2,使得显色反应受到抑制。其在652 nm处吸光度值的降低与半胱氨酸的浓度成线性关系,以此来检测半胱氨酸。该方法不需要昂贵的仪器,不需要材料制备过程、不用引入有机溶剂或重金属,结果可视化,并成功应用于生物样品中半胱氨酸的检测。表明无花果蛋白酶在生物样品分析中潜在的应用。我们的工作促进了无花果蛋白酶的模拟酶性质在医药诊断和生物化学方面的应用。(4)以汞为代表的重金属污染严重威胁着人类健康和社会环境,建立经济、高效的汞离子检测方法任重道远。基于无花果蛋白酶的过氧化物模拟酶性质以及半胱氨酸中巯基与汞离子的高亲和力实现了“抑制-恢复”比色法定量检测汞离子。无花果蛋白酶能够催化H2O2氧化TMB发生明显的蓝色反应,而半胱氨酸能够消耗H2O2,使显色反应受到抑制,溶液蓝色变浅。由于汞离子能够与半胱氨酸中的巯基结合,使溶液中半胱氨酸的浓度降低,溶液蓝色恢复。该比色法检测汞离子无需任何标记、经济、绿色,说明无花果蛋白酶可以作为过氧化物模拟酶应用于环境分析,展示了无花果蛋白酶的过氧化物模拟酶性质在环境监测中的巨大潜力。
其他文献
【摘要】本文通过对网络信息资源检索工具中的独立搜索引擎的体系结构和工作过程等进行阐述,旨在说明独立搜索引擎的基本工作原理。  【关键词】网络信息资源;搜索引擎;体系结构;工作过程;工作原理    随着国内外近年来电子图书馆、数字图书馆、虚拟图书馆的兴起与发展,图书馆的工作对象由文献资源扩展为信息资源。以计算机技术、网络技术、微电子技术为核心的现代化技术将从根本上改变图书馆的工作模式、工作方法甚至体
本文选择最有代表性的三相输入、三相输出交一交矩阵变换器为研究对象,在分析三相一三相矩阵变换器数学模型的基础上,给出了基于常用空间矢量脉宽调制策略的矩阵变换器调制模型
师:看到同学们一张张可爱的笑脸,我相信大家一定是幸福快乐的。可是,今天我们将要认识的这位朋友却遭遇了人生的不幸,他就是卡罗纳。(板书课题)师:昨天同学们已经做了预习,先请看大屏
采访工作是高校图书馆的基础性业务工作,关系到图书馆的文献资源建设水平,如何做好文献采访工作,是新时期高校图书馆面临的重要课题。
连续钢桁结合梁设计中,施工步骤、钢混弹模比、预拱度设置等都是影响最终成桥状态结构受力的关键因素。结合郑济铁路跨黄河北大堤(73+139+73)m连续钢桁结合梁的工程实践,重点
在素质教育的背景下,学校不仅需要传授给学生科学知识,还需要进行思想素质的教育,引导学生树立正确的人生观和价值观。道德教育应该与生活实际相结合,用生活中、现实中的例子进行
作文是初中语文教学中的重要组成部分,它对学生今后的个性发展以及阅读和思维习惯的养成,都起着非常重要的作用。笔者基于教学实践,分享了几点初中语文作文教学技巧,以供交流探讨
文章介绍了水泥混凝土路面在我国发展迅速的原因,同时各种质量通病也摆到了工程技术人员的面前,应予以高度重视;针对质量通病中的断板的形式,提出了主要从设计、原材料、配合比、