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目的:1.探讨骨骼肌源性干细胞体外分离纯化、培养、鉴定的方法,研究骨骼肌源性干细胞的生物学特性,为后续的实验奠定基础。2.评估不同浓度的大脑神经营养因子（BDNF）在体外诱导骨骼肌肌源性干细胞后,肌源性干细胞分化为神经样细胞的能力;并鉴定分化后的神经样细胞,为以后的神经组织工程提供种子细胞。方法:1.采用Ⅺ型胶原酶和胰蛋白酶二步消化法获取大鼠骨骼肌肌源性干细胞,微孔尼龙网纯化肌源性干细胞后进行体外原代和传代培养。观察细胞的形态,通过生长曲线、细胞融合率等指标研究骨骼肌源性干细胞的增殖与分化能力,利用免疫细胞化学染色和免疫荧光染色对所获得的细胞进行鉴定。2.体外提取纯度较高的肌源性干细胞后,采用bFGF、EGF诱导肌源性干细胞成细胞球样细胞团,在贴壁的情况下,用不同浓度的大脑神经营养因子（BDNF）诱导分化,并检测GFAP的表达。结果:1.二步消化法适用于骨骼肌肌源性干细胞细胞的获取。通过不同直径的微孔尼龙过滤网（11um,20um,30um,41um）纯化骨骼肌肌源性干细胞。在生长培养基作用下,细胞增殖旺盛:在分化培养基条件下,细胞分化良好,可融合成肌管。Desmin和CD34免疫细胞化学染色呈阳性。2.次代细胞在肌源性干细胞生长培养液中大部分贴壁生长,少数悬浮、成团。悬浮细胞生长较快,7～15 d出现神经球样细胞团,神经球转入预涂有多聚赖氨酸的24孔板后,加入不同浓度的BDNF,细胞逐渐贴壁生长,呈多种细胞形态:两极长的梭形细胞;有2～3个长突起的多角形细胞;突起多而短的多角形细胞;不规则形态细胞再作GFAP免疫组化染色,GFAP（+）。GFAP阳性率随BDNF浓度的升高而增加。结论:1.体外培养的骨骼肌肌源性干细胞具有良好的增殖与分化能力,微孔尼龙网过滤可纯化骨骼肌肌源性干细胞。控制血清的浓度,可调节细胞的增殖与分化,骨骼肌肌源性干细胞适用于组织工程和基因治疗。2.BDNF作用于骨骼肌肌源性干细胞,可使细胞向神经样细胞方向分化;骨骼肌肌源性干细胞不仅为骨缺损修复、肌萎缩、心肌梗死、压力性尿失禁等的治疗带来新的曙光,还可用来移植治疗神经系统的疾病。