基于蓝光光盘(BD)技术的黄曲霉毒素B1定量检测

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黄曲霉毒素B1(Aflatoxins B1,AFB1)是一种毒性极强的霉菌毒素,广泛存在于各类农产品中,具有强烈的致癌性,被划定为Ι类致癌物。至今为止,检测AFB1的方法大多需要用到特定检测设备以及专业操作人员,不利于AFB1现场快速定量检测。因此,研究建立准确度高、灵敏度高、能够现场快速检测的黄曲霉毒素检测方法,对食品安全监控具有重要意义。蓝光光盘(Blu-ray Disc,BD)是目前聚焦光斑最小的光盘存储技术,不仅可以作为全高清格式电影和大型电子游戏的存储媒介,凭借其优良的光学性能、纳米级的表面粗糙度和低廉的制作成本,还可以作为反应基底应用于化学分析和生物分子检测等领域,结合有着精密的伺服控制系统和光学读取机制的蓝光光驱作为检测器,有望成为生物分子检测领域中灵敏度高、准确度好、成本低、简单便携的现场检测技术。本文主要研究了基于BD技术的间接竞争免疫结构定量检测AFB1,该技术以BD光盘作为免疫反应基底,结合聚二甲基硅氧烷(PDMS)微流通道制备间接竞争免疫检测结构,以光驱为检测器,通过光盘数据质量诊断软件(Plex Utilities)读取分析生物光盘上的错误数信号实现对样品中AFB1的快速定量检测。本论文的主要研究内容如下:1.以水解活化处理后的BD光盘为基底,借助PDMS微流通道制备间接竞争免疫反应结构,经纳米金/银染信号放大后呈现出与AFB1浓度相对应的反应条带。2.开发了基于BD技术的生物分子定量检测平台。蓝光光盘采用纠错码和调制码两种编码校验光盘读取过程中产生的错误,标准光驱通过精密的伺服系统控制激光头寻迹和读取数据信息。基于此提出利用光盘自身的纠错机制以及光驱激光头精密的读取工作原理实现对生物光盘表面微阵列的诊断。3.基于BD系统检测平台对样品中AFB1进行定量检测。能够检测到0.5~200 ng/mL的范围,最低检测限也达到了0.5 ng/mL,完全满足了我国甚至欧美其他国家地区AFB1限定标准。另外我们研究了半成品生物光盘的保质期,可保质半年之久,从而验证了本方法的实用性。通过与商业化的ELISA试剂盒以及传统的检测方法HPLC的比较,也验证了本检测方法的准确可靠性。
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