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目的：卵巢癌是病死率最高的女性生殖道恶性肿瘤，总体五年生存率仅有25～30％。淋巴结转移的出现，是卵巢癌病情进展和恶化的重要信号之一，目前还没有有效的治疗和控制方法。因而有必要建立卵巢癌淋巴结转移的动物模型，为寻找有效的治疗措施提供必需的工具。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor D，VEGF-D)是血管内皮生长因子家族(vascular endothelial growth factor family，VEGFs)的新成员，可能通过诱导肿瘤淋巴管增生从而促进肿瘤淋巴结转移。本实验利用VEGF-D基因转染的卵巢癌SKOV3细胞株接种裸鼠，以期建立卵巢癌淋巴结转移的动物模型，并对VEGF-D促进肿瘤淋巴结转移的相关机制进行初步的探讨。方法：1.酶切法和DNA测序法检测已构建的重组质粒PcDNA3.1(＋)／VEGF-D中是否含有正确插入的VEGF-D基因序列；2.应用真核细胞转染试剂Lipofectamin2000分别将重组质粒PcDNA3.1(＋)／VEGF-D、空质粒PcDNA3.1(＋)转染卵巢癌SKOV3细胞株，G418筛选稳定表达株。RT-PCR检测3种细胞株：SKOV3、SKOV3／vector及SKOV3／VEGF-D中VEGF-D mRNA的表达；3.BALB／c裸鼠随机分为3组：未转染组、空载体对照组及VEGF-D实验组。分别以等量的SKOV3、SKOV3／vector及SKOV3／VEGF-D细胞接种于裸鼠左后肢足垫，定期观察成瘤情况、测量肿瘤体积，观察淋巴结的肿大和质地改变。Evan’s Blue注射显影观察裸鼠肿瘤及皮下淋巴管的增生和扩张情况；4.HE染色结合CA125及CD40免疫染色法检测裸鼠各组淋巴结的转移情况，免疫组化法检测肿瘤组织中VEGF-D蛋白表达、淋巴管密度、微血管密度及MMP-2表达，Hoechst33258荧光染色检测肿瘤组织的细胞凋亡情况。结果：1.质粒酶切和DNA测序结果证实，重组质粒PcDNA3.1(＋)／VEGF-D中含有正确插入的VEGF-D目的基因；2.RT-PCR法在转染细胞SKOV3／VEGF-D中检测到1000bp±的特异性条带，与VEGF-D基因片段的长度一致，而在转染细胞SKOV3／vector和未转染的SKOV3细胞中均检测不到该特征性条带；三种细胞均可以检测到β-actin基因的特异性条带；3.转染细胞SKOV3／VEGF-D接种裸鼠足垫后，10天左右即成瘤，自接种第25天起，在每个观察时点上的肿瘤体积均高于空载体对照组和未转染组(P＜0.05)；4.Evan’s Blue显影结果提示：VEGF-D实验组卵巢癌组织中淋巴管明显增生及扩张；LYVE-1免疫组化结果表明：VEGF-D实验组的卵巢癌组织内淋巴管密度为104.92±17.95／HPF，与空载体组(33.71±10.29／HPF)及未转染组(27.64±8.37／HPF)相比，淋巴管密度显著增高(P＜0.05)；5.裸鼠胭窝、髂动脉旁及肾门旁三组淋巴结转移率分析结果显示：VEGF-D组胭窝淋巴结的转移率为100％，空载体组及未转染组分别为33.3％、16.7％；髂动脉旁淋巴结转移率VEGF-D组为66.7％，空载体组及未转染组分别为16.7％和0；肾门旁淋巴结转移率VEGF-D组为50％，而空载体组和未转染组均为0。经统计学分析，VEGF-D实验组各级淋巴结转移率均高于空载体组和未转染组(P＜0.05)；6.免疫组化结果证实：VEGF-D实验组的卵巢癌组织中VEGF-D蛋白表达量显著增高，与空载体组和未转染组相比，差异有统计学意义(P＜0.01)；同时，实验组MMP-2蛋白表达也显著高于空载体组及未转染组(P＜0.05)；VEGF-D实验组肿瘤组织的微血管密度为89.60±24.50／HPF，高于未转染组(60.60±10.16／HPF)及空载体组(60.60±20.72／HPF)，差异有统计学意义(P＜0.05)；7.Hoechst33258荧光染色实验表明，VEGF-D实验组卵巢癌组织的肿瘤细胞凋亡率为3.2±0.748％，显著低于空载体组(10.6±2.15％)及未转染组(12.2±1.94％)，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：本研究采用基因转染得到了稳定表达VEGF-D基因的卵巢癌SKOV3／VEGF-D细胞株，通过裸鼠接种建立了卵巢癌淋巴结转移的动物模型。该模型不仅可以用于卵巢癌淋巴结转移治疗药物的筛选和疗效评估，而且为VEGF-D~＋的卵巢原发肿瘤的治疗研究提供了良好的实验动物工具。通过研究，我们证实VEGF-D主要通过诱导肿瘤淋巴管的增殖从而促进肿瘤淋巴结转移。我们发现，VEGF-D提高MMP一2蛋白表达、抑制肿瘤细胞凋亡，进一步促进了淋巴结转移的发生。实验结果表明，VEGF-D表达增强使癌组织生长速度明显加快，可能与VEGF-D间接诱导肿瘤新生血管形成及抑制肿瘤细胞凋亡的机制有关。我们的研究结果提示，VEGF-D可能是卵巢癌的潜在的治疗靶点之一，值得进一步研究。