研究目的:我们研究纳米粒子PLGA作为蛋白载体包裹CTLA-4抗体,探索PLGA/anti-CTLA-4对子宫内膜异位症小鼠模型腹腔液中CD4+CD25+Treg细胞的影响,PLGA/anti-CTLA-4对于小鼠子宫内膜异位症疾病的发生、发展的影响。实验方法:1.PLGA/anti-CTLA-4的粒径和电位通过dynamic light scattering测试;2.纳米粒子PLGA/anti-CTLA-4的形态通过投射电镜(TEM)观察;3.共聚焦显微镜观察PLGA/anti-CTLA-4和对照组anti-CTLA-4纳米粒在腹腔液中的分布;4.Micro BCA分析测定Anti-CTLA-4从PLGA中释放的量;5.流式细胞术分析CD4+CD25+Treg细胞在腹腔液中的分布百分比;6.在体外实验中,共培养消化的异位内膜细胞和磁珠分离出的腹腔液中的CD4+CD25+Treg细胞;7.异位的内膜细胞的增殖能力用Brd U ELISA assay分析;8.异位的内膜细胞的侵袭能力通过Matrigel invasion assay方法分析;9.ELISA方法分析CD4+CD25+Treg细胞分泌的细胞因子IL-10和TGF-β。结论:1.与anti-CTLA-4相比,PLGA/anti-CTLA-4在腹腔液中能够持续的存在,并且能够缓慢释放;2.而且PLGA/anti-CTLA-4持续减少小鼠子宫内膜异位症模型腹腔液中CD4+CD25+Treg细胞的数量;3.PLGA缓释的anti-CTLA-4结合在腹腔液中CD4+CD25+Treg细胞的表面CTLA-4配体上,在体外实验中,选取3个时间点测试,分别为3/7/14天,发现PLGA/anti-CTLA-4在抑制异位内膜细胞的增殖和侵袭方面比anti-CTLA-4有更大的优势;4.同时PLGA/anti-CTLA-4能够减少免疫抑制细胞CD4+CD25+Treg细胞分泌的细胞因子IL-10 and TGF-beta的数量,这说明了PLGA/anti-CTLA-4通过抑制CD4+CD25+Treg细胞分泌的细胞因子IL-10 and TGF-beta分泌来抑制异位内膜细胞的增值和侵袭能力;5.综上所述,PLGA/anti-CTLA-4或许能够成为治疗子宫内膜异位症的方法之一。