刺五加属于多年生落叶灌木,是临床畜禽用药的大宗药材,含有多糖、皂苷、黄酮和三萜类等活性成分。临床研究证实刺五加具有抑制炎症的能力,黄酮类化合物是抗炎功能的重要物质基础,利用现代化的提取技术和药理学研究手段,提高刺五加的利用效率,深入研究其活性成分的药理作用机制,是刺五加现代化发展的重要途径。本研究主要从刺五加总黄酮纯化和体内外抗炎药理作用机制着手,探讨刺五加总黄酮抗炎作用的分子水平机制。主要研究内容如下:1.大孔树脂分离纯化刺五加总黄酮从六种不同类型的大孔树脂（CAD-40、DM301、D-101、HPD-600、S-8、AB-8）中筛选出纯化刺五加总黄酮的最佳树脂,并探究吸附机理,使用超高效液相色谱串联质谱（UHLPC-MS/MS）比较纯化前后的刺五加总黄酮成分变化,并比较抗氧化活性。结果发现最佳大孔树脂为HPD-600型,最佳条件确定为上样液p H为3,上样流速及体积为3 BV·h-1和2.5 BV,解吸乙醇浓度60%,解吸流速及体积为3 BV·h-1和4 BV,总黄酮的纯度从28.79%提高到50.57%。对吸附机制的研究结果表明,HPD-600树脂吸附总黄酮的吸附过程符合准二阶动力学模型和Freundlich等温线模型,热力学参数表明此吸附过程是自发和吸热的。另外,与刺五加总黄酮的粗提取物（EAS）相比,纯化后的刺五加总黄酮（ASTF）有七种黄酮类化合物的含量有所增加,且抗氧化能力增强,但低于L-抗坏血酸。UHLPC-MS/MS检测结果显示,与EAS相比,ASTF中有7种黄酮类化合物的含量比增加。2.ASTF对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型的作用建立脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞炎症模型,探究刺五加总黄酮对RAW264.7细胞炎症的作用,通过Griess检测NO的含量变化,ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α、PGE2的含量,荧光定量PCR法检测IL-6、IL-1β、TNF-α、i NOS、COX-2 m RNA的表达量。结果表明,ASTF组可以呈剂量依赖性的抑制NO、IL-1β、IL-6、PGE2、TNF-α的分泌,并下调i NOS、COX-2、IL-1β、IL-6、TNF-αm RNA的表达水平。3.ASTF对LPS攻毒小鼠炎症模型的作用机制研究以LPS诱导小鼠建立肠道炎症模型,DEX和ASTF低、中、高剂量组(200、400、800 mg·Kg-1)通过灌胃给药,探究刺五加总黄酮对小鼠肠道炎症的作用机制,通过HE染色和PAS染色比较各组小鼠小肠肠段的肠道健康情况,ELISA检测小鼠血清中的IL-6、IL-1β、TNF-α、PGE2的含量,荧光定量PCR检测小鼠小肠组织中的IL-6、IL-1β、TNF-α、COX-2 m RNA的表达量,Western blot检测TLR4、My D88、NF-κB p65、NF-κB p-p65的蛋白表达水平,并通过细菌分类群16S r RNA扩增序列,分析小鼠肠道微生物群落的变化。结果显示LPS攻毒后的小鼠回肠、空肠、十二指肠的肠道出现肠壁变薄、隐窝消失、绒毛变短等破损情况以及杯状细胞分泌数量减少,各浓度的ASTF干预后能够改善回肠、空肠、十二指肠肠道形态、绒毛长度以及增加杯状细胞数量;与LPS小鼠相比,ASTF组小鼠的IL-1β、IL-6、PGE2、TNF-α含量明显降低,相关m RNA表达量降低,TLR4、My D88、p-p65/p-65蛋白表达水平也明显降低;另外,16S r RNA测序结果显示,LPS会扰乱小鼠肠道微生物的结构组成,ASTF可以提高小鼠肠道菌群的多样性,增加厚壁菌门比例,降低拟杆菌门比例,在一定程度上使被破坏的微生物群趋于正常。本实验成功得到刺五加总黄酮的大孔树脂纯化工艺,纯化后的刺五加总黄酮具有更强的体外抗氧化效果。通过体外细胞实验研究,证实刺五加总黄酮可以缓解LPS诱导的RAW264.7细胞炎症。小鼠肠道炎症实验显示刺五加总黄酮能够通过调节NF-κB通路相关蛋白表达和m RNA表达抑制炎症因子分泌来减轻炎症,并且能够调节肠道菌群。