目的:运用巢式PCR扩增牙釉质基因(Amelogenin gene,AMEL)的特异性引物序列,比较四种不同的单细胞裂解方法对PCR扩增率、诊断正确率、等位基因脱扣(allele dropout,ADO)率的影响,寻求最佳的裂解单细胞体系使之尽可能提高单细胞PCR的扩增效率的同时降低等位基因的脱扣率并将之应用到单卵裂球的分析,为胚胎植入前遗传学诊断建立一种高效的细胞裂解体系,提高PGD中性别诊断和单基因疾病诊断的能力。方法:以人外周血基因组DNA为阳性对照,收集400份男性单个淋巴细胞和200份女性单个淋巴细胞随机分成A、B、C、D四组,每组100份单个男性和50份单个女性淋巴细胞,分别放置于预先盛有纯水、碱裂解液(KOH/DTT)、蛋白酶K裂解液I(PK/SDS)和蛋白酶K裂解液II(PK/Tween-20)的PCR反应管中,分别用液氮冻融法、碱裂解法、蛋白酶K裂解法I、蛋白酶K裂解法II进行处理;随后用巢式-聚合酶链式反应扩增牙釉质基因在X、Y染色体上的两对特异性同源序列,琼脂糖凝胶电泳紫外透射仪下观察结果,比较四种裂解单细胞的方法对PCR扩增效率和等位基因脱扣率和性别诊断正确率的影响。收集单个卵裂球用蛋白酶K裂解法II进行处理后用巢式-聚合酶链式反应扩增牙釉质基因在X、Y染色体上的两对特异性同源序列后用巢式-聚合酶链式反应扩增牙釉质基因在X、Y染色体上的两对特异性同源序列,未洗涤过细胞的生理盐水为试剂空白对照;最后一次洗涤淋巴细胞后的生理盐水为微滴阴性对照。结果:液氮冻融法、碱裂解法、蛋白酶K裂解法I、蛋白酶K裂解法II处理后的单个淋巴细胞扩增率分别为:61.33%、86%、90%、95.33%,性别诊断正确率