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牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV）属于α疱疹病毒亚科,又称牛疱疹病毒1型（Bovine herpesvirus type 1,BHV-1）,可引起牛的鼻气管炎、结膜炎、流产、传染性脓疱性外阴阴道炎、初生牛的全身感染和免疫抑制等。牛传染性鼻气管炎（Infectious bovine rhinotracheitis,IBR）的病原体是BHV-1,该病是一种高度接触性的传染性疾病,呈世界性分布。IBR死亡率不高,但严重影响感染动物的生长,对牛奶生产和国际畜牧业的贸易有严重的限制,造成重大的经济损失。IBR的独特特征是BHV-1急性感染后,能在三叉神经节等感觉神经元中建立潜伏感染,潜伏的病毒可被周期性地激活,并在牛群中广泛传播,使得该病难以根除。采用gE基因缺失BHV-1疫苗免疫牛后,可用针对gE蛋白的单克隆抗体（Monoclonal antibody,MAb）建立相应的检测gE抗体的ELISA（gE-ELISA）,用gE-ELISA可以区分疫苗免疫牛和野毒感染牛,可逐步达到根除IBR的目的。因此本研究试图制备BHV-1 gE蛋白及其主要糖蛋白的MAb,对于牛传染性鼻气管炎的诊断及防控的意义重大。本研究采用两种方法免疫BALB/c小鼠时,一种方法是用全病毒免疫小鼠,另一种方法用BHV-1的gE基因缺失毒株免疫小鼠,同时采用环磷酰胺（CP）免疫小鼠使小鼠对gE基因缺失毒株产生免疫抑制后再免疫全病毒。采用纯化的BHV-1全病毒和gE缺失病毒包被ELISA板,用于杂交瘤细胞株的筛选。通过筛选,本研究制备了10株BHV-1的单克隆抗体（Monoclonal antibodies,MAbs）。间接免疫荧光结果表明这些MAbs均与BHV-1及BHV-1的gE基因缺失毒株反应。MAb的亚型鉴定结果表明6株MAbs的亚型为IgM/κ,3株为IgA/λ,1株为IgG2b/κ。Western blot的试验结果表明10株MAbs与BHV-1均无反应条带,表明10株MAbs针对的抗原表位均为构象表位。同时,利用本实验室已有的3株杂交瘤细胞株,即2株分泌抗BHV-1的VP8蛋白的MAbs杂交瘤细胞株3C2和1F5及1株分泌针对gD蛋白的MAb杂交瘤细胞株5B7,进行了抗原表位的鉴定。首先利用杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,然后用肽扫描技术确定MAb所针对的抗原表位。鉴定结果表明BHV-1的VP8的MAb 3C2的抗原表位为138PHRSLLERTA147,MAb1F5的抗原表位为183GGGQEPG189;BHV-1的gD蛋白的MAb 5B7针对的抗原表位为336PEGWPSL342。3株MAbs的表位均为线性表位,进一步分析表明3株MAbs所针对的抗原表位在不同的BHV-1分离株中高度保守。综上所述,本研究制备了10株BHV-1的MAbs,这10株MAbs所针对的抗原表位均为构象表位。应用肽扫描技术对实验室已有的3株BHV-1的MAbs进行了表位鉴定,结果表明3株MAbs所针对的抗原表位均为线性表位,且这些表位在不同的BHV-1分离株中均高度保守。本研究为BHV-1的诊断、VP8和gD蛋白结构与功能的研究及后续的BHV-1的gE蛋白的MAb的制备奠定了基础。