【摘 要】
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目的阐明疏风活血方在体外对黑素代谢的影响;探索自噬在黑素代谢中的作用;探寻自噬在疏风活血方调节黑素代谢的作用。方法使用L-Dopa法染色鉴定黑素细胞,每日观察细胞形态;使
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目的阐明疏风活血方在体外对黑素代谢的影响;探索自噬在黑素代谢中的作用;探寻自噬在疏风活血方调节黑素代谢的作用。方法使用L-Dopa法染色鉴定黑素细胞,每日观察细胞形态;使用CCK-8法测定细胞增殖;使用NaOH法测定黑素合成;使用细胞裂解法检测TYR活性;使用Westernblot法细胞检测自噬相关蛋白Beclin1和LC-3Ⅱ表达。结果1.与C组相比,疏风活血方对体外培养的B16细胞增殖有抑制作用(P<0.05),同浓度RS组与R组相比,B16的细胞增殖率更低,但两者没有统计学差异(P>0.05);疏风活血方对酪氨酸酶活性及黑素合成起促进作用(P<0.05),同浓度RS组与R组相比,B16的酪氨酸酶活性及黑素黑素含量更高,但两者没有统计学差异(P>0.05);雷帕霉素对体外培养的B16细胞增殖有抑制作用(P<0.05);对酪氨酸酶活性及黑素合成起促进作用(P<0.05);疏风活血方及雷帕霉素组均能上调自噬相关蛋白LC3B及Beclin1的含量,上调两蛋白的作用依次为0.98mg/ml S组、0.98mg/ml RS组及Rap 50组。2.与C组相比,疏风活血方对体外培养的正常人表皮黑素细胞的增殖有抑制作用(P<0.05),同浓度RS组与R组相比,黑素细胞的细胞增殖率更高,但两者没有统计学差异(P>0.05);S组各浓度药物对酪氨酸酶活性在低浓度时呈促进作用(P<0.05);在中高浓度时呈抑制作用,但无统计学意义(P>0.05);中低浓度S组对黑素细胞黑素合成有促进作用(P<0.05),中浓度(0.49mg/ml)S组对黑素合成无明显影响(P>0.05),高浓度(0.98mg/ml)S组对黑素合成呈抑制作用(P<0.05)。同浓度RS组与R组相比,黑素含量较S组增加,但两者没有统计学差异(P>0.05);各浓度雷帕霉素对体外培养的正常人表皮黑素细胞的细胞增殖有促进作用(P>0.05);对酪氨酸酶活性及黑素合成均起促进作用(P<0.05);疏风活血方及雷帕霉素均能上调自噬相关蛋白LC3B及Beclin1,上调两蛋白的作用依次为0.25mg/mlS组、0.25mg/ml RS组Rap 50组。结论1.疏风活血方可能通过自噬途径对体外培养的鼠B16黑素瘤细胞黑素代谢起调节作用,对其细胞增殖有抑制作用;对酪氨酸酶活性及黑素合成起促进作用;能上调自噬相关蛋白LC3B、Beclin1。2.疏风活血方能通过自噬途径对体外培养的正常人表皮黑素细胞黑素代谢起调节作用,对其细胞增殖有抑制作用;对酪氨酸酶活性及黑素合成主要起促进作用;能上调自噬相关蛋白LC3B及Beclin1。3.自噬诱导剂雷帕霉素能对两细胞模型黑素代谢起调节作用,对B16细胞增殖起抑制作用,对正常人表皮黑素细胞增殖起促进作用;对两细胞模型的酪氨酸酶活性和黑素合成均起促进作用,并能上调自噬相关蛋白LC3B和Beclin1。
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