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第一部分：B-NHL细胞中BAFF及其特异性受体BAFF-R的表达和定位的研究研究目的：明确B-NHL细胞系Raji、Jeko-1、Pfeiffer细胞中BAFF和BAFF-R的表达和定位。研究方法：采用RT-PCR和Western blot技术分别检测B-NHL细胞系Raji、Jeko-1、Pfeiffer细胞中BAFF及BAFF-R在mRNA和蛋白水平的表达；细胞免疫荧光化学法和激光共聚焦技术检测BAFF、BAFF-R在Jeko-1、Pfeiffer细胞中的定位；流式细胞术检测B-NHL细胞系Raji、Jeko-1、Pfeiffer细胞表面BAFF及BAFF-R的表达情况。研究结果：RT-PCR、Western blot和流式细胞术检测结果发现B-NHL细胞系Raji、Jeko-1、 Pfeiffer细胞在mRNA和蛋白水平均有不同程度表达BAFF和BAFF-R, Jeko-1和Pfeiffer细胞的表达量相对较高,Raji细胞的表达量相对低。免疫荧光定位检测证实BAFF和BAFF-R表达在细胞膜上。结论：B-NHL细胞膜上表达BAFF和BAFF-R,其中Jeko-1和Pfeiffer细胞的表达量高于Raji细胞。第二部分：BAFF体外促进B-NHL细胞增殖及其相关机制的研究研究目的：探索rhBAFF(重组人BAFF)对B-NHL细胞增殖的影响及其作用机制。实验方法：MTT法检测Raji、Jeko-1-Pfeiffer细胞经rhBAFF刺激前后的细胞活力；Western blot技术检测rhBAFF作用后Jeko-1和Pfeiffer细胞中NF-κB、PI3K/AKT、ERK等信号通路相关分子和BCL-2家族凋亡相关蛋白表达的变化。研究结果：MTT结果显示Raji、Jeko-1、Pfeiffier细胞经500ng/ml rhBAFF作用48h后细胞存活率分别为125.28±10.86%,170.89±15.73%,140.77±7.50%,分别是对照组的1.25、1.71、1.41倍(各组均P<0.05)；同时也可以看到不同浓度(3.90625、7.8125、15.625、31.25、62.5、125、250、500ng/ml) rhBAFF作用Jeko-1细胞48h后,细胞存活率随BAFF浓度增高而升高(分别为113.53±4.17%,137.16±4.79%,145.34±7.38%,150.90±7.67%,159.67±6.32%,160.31±9.12%,163.20±3.61%,170.89±15.73%),呈现浓度依赖的细胞增殖。Western blot结果显示经不同浓度rhBAFF处理Jeko-1、Pfeiffer细胞后P52, p-IκBα、p-AKT、p-ERK水平和核蛋白P65均呈上调趋势,IκBα水平呈下调趋势；抗凋亡蛋白BCL-2、BCL-XL、MCL-1水平呈现上调趋势,凋亡前体蛋白BAX水平则呈现下调趋势。结论：BAFF对Raji、Jeko-1、Pfeiffer细胞具有明显的促增殖作用,其机制与活化NF-κB、PI3K/AKT、ERK信号通路和抗凋亡蛋白增加有关。第三部分：B-NHL患者外周血BAFF和APRIL水平及其临床意义实验目的：明确B-NHL患者外周血血清中BAFF和APRIL表达水平及相互关系以及与临床特征和病理组织中Ki67表达量之间的关系,明确患者血清中BAFF表达水平和IL-10表达水平的关系。研究方法：收集77例2014.1-2014.12间来自浙江大学医学院附属第二医院的B-NHL患者和65例健康体检者的外周血血清,收集患者临床资料如患者年龄、性别、疾病分期,B症状,淋巴瘤结外累及数量,血清LDH, B2MG表达水平,ECOG评分,IPI疾病分层和淋巴结病理组织中淋巴瘤细胞CD分子的表达和相关生物分子的表达；ELISA法检测B-NHL患者及健康志愿者外周血血清中BAFF、APRIL、IL-10的水平；采用Mann-Whitney U检验分析BAFF、APRIL、IL-10在初发、复发/难治性B-NHL和健康志愿者间水平的差异,采用Spearman相关性分析和卡方检验分析BAFF、APRIL与临床特征的关系以及BAFF和APRIL、IL-10水平的相关性。研究结果：48例初发B-NHL,患者中BAFF平均水平为1739.91±1013.07pg/ml,显著高于健康对照组的969.25±346.30pg/ml(P<0.05),29例复发／难治性B-NHL患者的BAFF水平平均值为3526.01±2080.98pg/ml,明显高于初发患者和健康对照组(P<0.05)。初发患者BAFF水平分层与临床特征的卡方检验结果显示高BAFF水平组患者中高ECOG评分、高IPI评分、高LDH水平人数明显多于低BAFF水平组(P<0.05). Spearman相关性分析显示BAFF水平与Ann Arbor分期、血清B2MG水平、ECOG评分和IPI评分呈正相关性,相关系数分别为0.323、0.381、0.390和0.442(P<0.05)。外周血血清中IL-10水平在34例初发B-NHL患者、25例复发/难治性患者和32例健康对照者中的中位值分别为20.19pg/ml、6.89pg/ml和0.OOpg/ml,患者组与对照组间具有显著性差异(P<0.05),BAFF和IL-10分层后卡方检验发现,无论初发还是复发患者,高IL-10水平组患者中BAFF水平增高人数明显多于低IL-10水平组(P<0.05),相关性分析进一步证实了二者的正相关性,在初发患者和复发/难治性患者中相关系数分别为0.363和0.620,P值分别为0.030和0.001。39例初发患者外周血血清中APRIL平均水平为3.44±2.57ng/ml,显著高于对照组1.33±0.86ng/ml, P<0.05;而20例复发/难治性患者APRIL水平平均值为3.45±2.98ng/ml,与初发患者无明显差异(P>0.05)。相关性分析也未发现APRIL水平与临床特征和BAFF水平有相关性。结论：B-NHL患者外周血血清中BAFF水平明显升高,尤其在复发/难治性患者中更高,BAFF水平与患者ECOG评分、IPI评分、LDH水平、Ann Arbor分期、B2MG、 IL-10呈正相关,提示BAFF水平越高,疾病的严重程度越高；而APRIL水平虽有升高,并未显示其在疾病程度评价中的作用。