论文部分内容阅读
目的本文旨在观察OK432联合肿瘤冻融抗原诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞(DCs)成熟及其对树突状细胞分泌IL-12水平的影响,观察该瘤苗在体内的抑瘤作用并探讨其机制,为临床开展肿瘤生物疗法提供实验依据。方法利用贴壁粘附法分离小鼠骨髓单核细胞,并在含10%胎牛血清(FCS)、重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CFS)、重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)的培养体系中诱导培养,以共孵育方式将小鼠前胃癌冻融抗原负载于DCs,并应用OK432作为DCs的成熟刺激因子,进一步刺激DCs成熟,后者即为抗胃癌DCs瘤苗,光镜和透射电镜下观察细胞形态。ELISA法检测各组DCs上清液中IL-12含量。小鼠前胃癌(MFC)按常规615小鼠体内保种传代,取第三代荷瘤小鼠尾静脉注射DCs瘤苗,21天后颈椎脱臼法处死小鼠,取肿瘤组织及脾进行称重。采用半定量RT-PCR及ELISA法分别检测各组小鼠肿瘤组织中IL-12 mRNA与IL-12含量,免疫组织化学法检测瘤组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表达水平,探讨DCs抑制小鼠前胃癌生长的作用机制。结果1.培养7天的DCs电镜观察结果显示OK-DCs组DCs形态更加具备成熟的DCs特征。2.培养7天后的细胞上清液中IL-12浓度测定结果显示TL-DCs组高于BM-DCs组(P<0.001),OK-DCs组高于TL-DCs组(P<0.001)。3. TL-DCs组的瘤重(1.42±0.25)小于BM-DCs组(2.33±0.22)(P<0.001),OK-DCs组瘤重(0.96±0.17)小于TL-DCs组(P<0.001)。4.肿瘤组织中IL-12 mRNA表达水平和IL-12含量测定结果显示TL-DCs组高于BM-DCs组(P<0.001),OK-DCs组高于TL-DCs组(P<0.001)。5.肿瘤组织中VEGF阳性细胞数OK-DCs组低于TL-DCs组(P<0.001),TL-DCs组低于BM-DCs组(P<0.001)。结论1.采用OK432联合肿瘤冻融抗原制备小鼠DCs前胃癌瘤苗的方法具有方法简单、成本较低、培养时间短和抗肿瘤活性高等优点。2. OK-432联合肿瘤冻融抗原冲击可提高小鼠骨髓来源的DCs瘤苗分泌IL-12的能力。3.OK432联合肿瘤冻融抗原冲击诱导的DCs瘤苗在体内具有抑制肿瘤生长作用,其作用机制可能是:DCs瘤苗浸润肿瘤组织并分泌大量IL-12,后者抑制肿瘤组织VEGF表达进而抑制新生血管生成,因此,肿瘤生长受抑制。