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一、目的和意义1.目的1.1研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)(?)基因C677T多态性与山东地区非综合征性唇腭裂(NSCL/P)的相关性。1.2研究骨形态发生蛋白4(BMP4)基因T538C多态性与山东地区非综合征性唇腭裂(NSCL/P)的相关性。1.3研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T和骨形态发生蛋白4(BMP4)基因T538C多态性在山东地区非综合征性唇腭裂的致病中是否存在关联性。2.意义2.1从分子生物学水平研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T和骨形态发生蛋白4(BMP4)基因T538C多态性与NSCL/P的关系,探讨NSCL/P发生的机制。2.2确定非综合征性唇腭裂的易感基因,为NSCL/P的出生进行风险评估。进一步为临床有效的预防和监测唇腭裂缺陷儿的出生提供依据,有利于我国的计划生育和优生优育工作。二、方法1.本研究于2008年10月在山东大学口腔医学院山东省口腔生物医学重点实验室、山东省优生技术重点实验室进行。对2005年8月至2008年10月曾在山东大学齐鲁医院口腔颌面外科采取手术治疗的来自山东地区的NSCL/P患者家庭66组和同期健康查体的正常家庭50组进行检测。2.按要求采集患者家庭成员和对照组家庭成员的外周血液。用常规酚／氯仿抽提法提取DNA,其浓度用紫外分光光度计测定。DNA热循环仪进行PCR扩增。(已知引物、PCR反应体系)采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法检测基因型。酶切产物电泳分离及银染显色后观察结果。3.分别统计患者组和对照组个体及家庭成员的基因型和等位基因,通过Hardy-Weinberg平衡检测,并用SAS统计软件进行x2检验计算病例组与对照组基因型及等位基因频率的差别及构成比的差别,相关风险值分析和95%可信区间的计算以及相关性的检测。三、结果1. MTHFR基因对MTHFR C677T基因进行分析,计算得到携带T等位基因的父母的子代患非综合征性唇腭裂的危险性是不携带T等位基因的父母的子代的2.278倍；TT突变纯合子患非综合征性唇腭裂的危险性是非TT纯合子的4.690倍；母子都是TT突变纯合子的子代患非综合征性唇腭裂的危险性是非母子都是TT纯合子的子代3.296倍。2.BMP4基因对BMP4 T538C基因进行分析,计算得到携带C等位基因的父母的子代患非综合征性唇腭裂的危险性是不携带C等位基因的父母的子代的1.914倍；CC突变纯合子患非综合征性唇腭裂的危险性是非CC纯合子的3.375倍。3. MTHFR基因C677T和BMP4基因T538C多态性的联合作用与非综合征性唇腭裂的关系由非条件Logistic回归模型计算,以MTHFR (CC)基因型和BMP4(TT)基因型为参照,统计结果显示,P均>0.05,结果无明显统计学意义。四、结论1.山东地区NSCL/P与MTHFR基因C677T的多态性相关,与父母的基因型存在联系。T基因在母子组合的研究中有统计学意义,父母传递给子代的T等位基因对后代的患病有重要作用。2.山东地区NSCL/P与BMP4基因T538C的多态性相关,与父母的基因型存在联系。C基因在母子组合的研究中有统计学意义,父母传递给子代的C等位基因对后代的患病有重要作用。3.MTHFR基因C677T和BMP4基因T538C在山东地区非综合征性唇腭裂的致病中未发现明显的关联性。