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目的
肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤，从大体上可分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)。其中大部分为非小细胞肺癌，约占80％，小细胞肺癌约占20%。约65%～70%的非小细胞肺癌在就诊时就已处于晚期。早期小细胞肺癌可以取得较好的治疗效果。但晚期的非小细胞肺癌无论手术或者放射治疗均不能取得满意的治疗效果。单克隆抗体作为一种新的治疗方法，虽然在临床上还不够成熟，但是它是一种具有很大潜力的免疫学治疗方法。
目前现有的研究证实，抗DR5单克隆抗体(aDR5mAb)可通过与DR5的特异性结合，诱导表达DR5的肿瘤细胞凋亡，但同时也有报道证明抗DR5单克隆抗体亦存在肝毒性。目前制备的抗DR5单克隆抗体多数属于鼠源性，直接作用人体会产生机体排斥反应，降低治疗效果。故为了降低人体对单克隆抗体的排斥反应，对单克隆抗体进行改造，成为了新的方向。本实验室已制备出抗人DR5单克隆抗体，并证实其能明显的诱导肿瘤细胞凋亡且无明显肝毒性，本实验室钓出了该单克隆抗体的轻重链基因，构建并表达了抗DR5单链抗体。为了进一步研究单链抗体的功能，我们拟探讨其特性，体内抑瘤效果及与放疗联合的作用体外抑瘤效果。
方法:
本实验室构建了抗DR5单链抗体(aDR5scFv)，通过ELISA方法对单链抗体进行了特异性分析。通过MTT法检测aDR5scFv对肺腺癌细胞973的细胞毒效应；流式细胞术检测aDR5scFv诱导973的凋亡率；Western blot检测Bax，caspase-3，细胞色素c的蛋白表达；为了研究体内aDR5scFv对肺腺癌的作用，我们应用973细胞建立了裸鼠肺腺癌模型，腹腔注射给药，并联合放射治疗，观察aDR5scFv的体内抑瘤效果，通过HE染色和TUNEL分析其可能机制。
结果:
结果发现aDR5scFv能够与eDR5特异结合，MTT结果显示aDR5scFv抑制973细胞生长呈剂量依赖性，aDR5scFv终浓度分别为0.225，0.45，0.9，1.2mg/mL应用200μL时，对973细胞的生长抑制率分别为28.8%，52.3%，65.3%，89.8%；与流式细胞术检测结果相符。Western blot检测到aDR5scFv作用细胞4h后Bax，caspase-3，细胞色素c蛋白表达上调。
体内实验观察到aDR5scFv实验组与空白组相比，肿瘤体积明显减小，并观察到aDR5scFv与放疗联合应用时，肿瘤体积明显小于单独应用组。TuneL及HE染色发现aDR5scFv与放疗联合应用组凋亡明显强于单独应用组。
结论:
1．aDR5scFv能够特异结合eDR5；
2．体外实验表明aDR5scFv抑制肺腺癌973细胞生长与Bax，caspase-3及细胞色素c表达上调相关；
3．体内实验表明aDR5scFv能够抑制973细胞生长，并且对正常肝细胞无毒性作用。aDR5scFv与放疗联合应用组明显强于单独应用组。