艾灸“足三里”对化疗后骨髓抑制小鼠骨髓细胞中Notch信号通路影响的实验研究

来源 :甘肃中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:liuqinggang
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目的:围绕艾灸改善荷瘤鼠化疗后骨髓抑制、提升外周血白细胞水平这一主题,探究艾灸治疗后Notch信号传导通路变化的规律,阐明艾灸的升白作用是否通过调节这一信号通路系统达到治疗的目的,探讨艾灸治疗化疗后骨髓抑制的作用机制,为肿瘤化疗后的骨髓抑制临床应用灸法提供科学依据。方法:选取60只SPF级雄性昆明小鼠,体质量18±2g,周龄6-8周,在实验室自由饲养天。A549肺癌种鼠无菌条件下剥离瘤块,制成匀浆,调整至细胞数量1×10~7/ml,各取0.2ml接种于50只小鼠腋下。接种第7天选择30只肿瘤大小相似的荷瘤鼠,随机分为空白组、模型组、艾灸治疗组。另设模拟接种的正常组,分组后使用苦味酸对实验小鼠进行染色并编号,之后检查基础白细胞计数,将两极小鼠删除,每组保留8只用于实验的小鼠。依据《新药(西药)临床前研究指导原则汇编》的造模方法,用环磷酰胺(CTX)建立骨髓抑制小鼠模型。按照100mg/kg/d用药量腹腔注射,连续3天。依据环磷酰胺药代动力学过程,4小时后药物活性消失(中山医学院等编著.基础药理学.人民卫生出版社,1979:442),模型即成。空白组实验小鼠按体重0.02ml/g的用药量,腹腔注射生理盐水。之后按照造模的顺序进行治疗,艾灸组将实验小鼠固定于自制小鼠固定板,在“足三里”穴四周涂抹凡士林,之后将自制的小艾粒点燃贴置于“足三里”穴上艾灸,剂量为5壮,每日治疗1次,连续治疗5天;空白组、模型组,每日做捆绑与抓取刺激,疗程同艾灸组。治疗后观察艾灸对白细胞的影响规律,HE染色观察骨髓组织病理变化,免疫组化法检测相关基因的蛋白表达,通过观察艾灸对化疗小鼠Notch信号通路相关基因表达水平的变化,从骨髓细胞信号转导通路方面探讨艾灸改善化疗后骨髓抑制、提升白细胞的作用机制。结果:1.血常规检测结果显示,正常组、空白组及模型组在治疗前后的整个过程中外周血白细胞数目未发生显著性变化,其中正常组、空白组小鼠保持在正常范围内,模型组小鼠保持在低水平范围内;艾灸组小鼠在治疗前白细胞数目很少,随治疗时间的增加,白细胞数目逐渐显著升高,至第五天时达到正常水平(P<0.05)。2.HE病理检测结果显示:正常组和空白组骨髓组织结构保持完整,骨髓细胞均一分布;模型组小鼠骨髓组织的结构遭到破坏,骨髓细胞分布紊乱,细胞密度减少;治疗组小鼠骨髓组织结构恢复正常,骨髓细胞密度上升,结构完整。3.各组小鼠骨髓组织中CSL、Jagged1、Notch1蛋白表达结果显示:正常组和空白组小鼠骨髓组织中CSL、Jagged1、Notch1蛋白变化无差异。与空白组小鼠相比,模型组小鼠骨髓组织中CSL、Jagged1、Notch1蛋白表达均显著降低(P<0.05);与模型组小鼠相比,艾灸组小鼠骨髓组织中CSL、Jagged1、Notch1蛋白表达均显著升高(P<0.05)。结论:1.艾灸能有效提升小鼠化疗后的白细胞水平。2.对小鼠化疗后骨髓抑制的治疗作用机制,可能是通过调控Notch信号通路上的CSL、Jagged1、Notch1,来激活Notch信号通路,增强骨髓造血功能,以此调节骨髓造血干细胞,从而达到治疗效果。
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