【摘 要】
：
溶菌酶是一种来源于动物、植物及微生物等的一种具有酶活性的抑菌蛋白。鱼类溶菌酶在抵御外来微生物入侵过程中发挥关键作用。石斑鱼c型溶菌酶（Epinephelus coioides lysozyme,Ec-cLYZ）是鱼类免疫系统的重要组成部分,有较强的抗热性,是一种稳定的蛋白质,具有广谱抑菌效果,同时具有抗真菌及抗病毒等作用;抗菌肽是存在于生物体内由免疫系统分泌的具有预防和抑制各种有害物质入侵机体的肽
【基金项目】
：
国家自然基金项目（批准文号:31572492）
论文部分内容阅读
溶菌酶是一种来源于动物、植物及微生物等的一种具有酶活性的抑菌蛋白。鱼类溶菌酶在抵御外来微生物入侵过程中发挥关键作用。石斑鱼c型溶菌酶（Epinephelus coioides lysozyme,Ec-cLYZ）是鱼类免疫系统的重要组成部分,有较强的抗热性,是一种稳定的蛋白质,具有广谱抑菌效果,同时具有抗真菌及抗病毒等作用;抗菌肽是存在于生物体内由免疫系统分泌的具有预防和抑制各种有害物质入侵机体的肽类化学物质。蜂毒肽是蜂毒的主要组成部分,具有广泛的抗细菌、抗真菌和抗病毒等作用,但天然蜂毒肽的溶血活性使其应用受到限制,通过对蜂毒肽（Mellittin,MEL）结构的改造,可以使其溶血活性大大降低。因此,溶菌酶和抗菌肽的抑菌活性在新型抑菌药物的研发方面广为人知。本试验将目的基因Ec-cLYZ和改造后的蜂毒肽序列用T2A连接肽连接,分别将Ec-cLYZ、MEL和Ec-cLYZ-MEL基因克隆至毕赤酵母表达载体pPICZαA,获得高效稳定表达的重组载体pPICZαA-MEL、pPICZαA-Ec-cLYZ和pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL;经PCR、双酶切和测序等方法检测目的基因,将测序正确的重组质粒用限制性内切酶Sac I单酶切线性化,电转化至毕赤酵母表达菌株GS115内,经通用引物5′AOX1/3′AOX1及高浓度zeocin抗性筛选,得到高效表达的Mut+菌株,分别命名为GS115/pPICZαA-MEL、GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ、GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL;利用0.5%甲醇诱导表达,每24 h补加甲醇至0.5%,于28℃、250 rpm条件下震荡培养,每12 h取一次上清,测定总蛋白浓度,结果表明,GS115/pPICZαA-MEL、GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ、GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL的最佳表达时间分别为96 h、72 h、96 h;上清液经His-tag蛋白纯化试剂盒纯化后,获得的MEL、Ec-cLYZ、Ec-cLYZ-MEL蛋白浓度分别为27.31、28.73、35.49mg/L。利用CCK-8试验分析浓度为150、75、37.5、18.75、9.38、4.7 mg/L的重组蛋白MEL、Ec-cLYZ、共表达Ec-cLYZ和MEL在12 h、24 h、36 h处对HEK293A细胞的毒性作用,结果表明,在所测浓度范围内,在12 h、24 h及36 h内共表达Ec-cLYZ和MEL处理组细胞存活率与PBS组细胞存活率无显著差异（p＞0.05）,几乎无毒性作用。同时,检测浓度为150、75、37.5、18.75、9.38、4.69、2.35 mg/L的重组蛋白MEL、Ec-cLYZ、共表达Ec-cLYZ和MEL对兔红细胞的溶血活性,结果表明,共表达Ec-cLYZ和MEL处理组在浓度为150 mg/L时的红细胞溶血率为2.3%,显著低于MEL处理组（p＜0.01）。通过测定不同浓度重组蛋白的抑菌率并与同浓度氨苄西林的抑菌率对比,用牛津杯法测定重组蛋白对实验菌株的抑菌圈直径。结果表明,纯化的共表达Ec-cLYZ和MEL对大肠杆菌K88、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26001、表皮葡萄球菌ATCC 12228、无乳链球菌、停乳链球菌ATCC 9809、肺炎克雷伯菌、多杀性巴氏杆菌均有抑菌活性,相对于MEL组对肺炎克雷伯菌的无抑菌活性和Ec-cLYZ组对多杀性巴氏杆菌无抑菌活性而言,共表达Ec-cLYZ和MEL共表达组抑菌范围更广。同浓度共表达Ec-cLYZ和MEL对大肠杆菌K88、停乳链球菌ATCC 9809、无乳链球菌的抑菌率极显著高于氨苄西林处理组（p＜0.01）。本试验构建的毕赤酵母表达菌株GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL所表达的蛋白对测试菌株表现出良好的抑菌活性,且无细胞毒性作用和溶血活性,为细菌性疾病的预防和治疗提供新的思路于参考。
其他文献
在近年建构中国电影学派的学术热潮中，有学者倡导中国电影民族化研究的“语言学转向”，提出以承载评价（反沉迷）功能的主次正反打、跳轴“、主客间”构图等为代表的“中国影像程式”概念。在实践诗学和中西比较视野的观照下，“影像程式”在异质性表现方面存在严重缺陷，在自觉性意识与群体性应用方面也缺乏充分的说服力，尤其在表达意味上丢失了“中国性”。为此，我们应从文化精神的角度而非沉迷/反沉迷、评价/非评价的功能角
“岗课赛证”融合育人模式是当前一种新型的人才培养模式，关注产业岗位、行业标准、技能大赛、职业证书，注重产教对接，有效地推动了产业链、教育链、创新链的有机融合。文章通过对“岗课赛证”融合育人的价值探索、当前主流实践模式的总结以及“岗课赛证”融合育人模式现状问题的分析、总结，提出了完善保障机制、重构课程体系、创新育人方式和建立多维评价体系相结合的育人实施方案。
＜正＞所谓校本研修,是以校本培训和校本教研为基础。在深入推进新课程改革的过程中,校本研修既能促进教师的专业成长、提升学校的教学质量,对于打造学习型、研究型、本土化的教师研修团队,深化学校的内涵发展具有重要意义。下面谈谈村级小学校本研修的现状及应对策略。
本文运用案例研究法，立足于华能国际绿色转型实践，对其转型的动因、转型路径进行剖析，并进一步研究转型所带来的环境绩效和财务绩效的变化。研究发现：火电企业进行绿色转型会给环境绩效带来正向的推动作用，并同时能够增强企业的盈利能力，将持续为企业带来良好的收益。文章从企业的绿色转型、科技创新及政府引导等方面提出了相应的对策与建议。
采用差示扫描量热法、X射线衍射法和扫描电镜观察法比较添加不同质量分数（20%～50%）的2种糖醇（山梨糖醇和麦芽糖醇）对淀粉糊化特性、老化特性、老化动力学、玻璃化转变温度、结晶特性及微观结构的影响。结果显示，随着2种糖醇质量分数的增加，玉米淀粉的老化焓、结晶速率、相对结晶度均逐渐降低；在贮藏过程中，添加山梨糖醇和麦芽糖醇显著增强了玉米淀粉在2θ为20 °的衍射峰，淀粉凝胶网络结构的蜂窝状孔洞变大、
在新世纪，乡村振兴战略的推进也进入全新阶段。农业发展与我国经济社会发展存在密切的关系，现代农业是国家发展的关键构成部分。它属于农业发展新形式，在乡村振兴背景下，为农村农业发展提供了明确的方向和支撑。对现代农业进行了分析，探讨了新时期现代农业发展思路，以期能为相关人士提供借鉴。
在阜平北辛庄圈定一处脉石英找矿靶区，分布在阜平隆起五台期韧性剪切带发育区内。本文依据找矿工作成果和搜集资料，分析认为该地区脉石英属于低温—中低温变质热液成因，规模较小，有两种产出形态，“脉状”和“透镜状”，前者规模相对较大。脉石英化学成分及含量基本符合高纯石英原料矿的要求。通过对脉石英地质特征进行总结和成因分析，旨在为河北省高纯石英原料找矿提供帮助和指导。
目的 探讨孕期摄入辛辣食物与剖宫产术后睡眠质量的关系，为术后早期康复提供参考。方法 回顾性纳入2018年5月-2019年5月在我院行择期剖宫产术的临床病例共332例，根据孕期吃辣频率将患者分为吃辣频率＜2 d/周组（A组）和吃辣频率≥2 d/周组（B组）,分别采用倾向评分匹配、Logistic回归和亚组分析不同吃辣频率对剖宫产术后重度睡眠障碍的影响。结果 通过倾向评分匹配均衡混杂因素后，两组各有1
文章以A工程为案例，通过定性与定量相结合的方式，探讨在A工程建设过程中因工程过程管理情况对工程造价的影响，分析A工程中过程管理存在的问题，并提出相应对策。
在国际中文教育的课堂中，语音教学是汉语教学的基础性环节之一，并且语音教学贯穿于汉语学习者学习汉语的全过程，对汉语学习者来说，语音学习关系到发音的标准问题，语音能力是对汉语学习者语言能力考核的重要指标。由于汉语学习者不熟悉汉语拼音方案的规则，以及不清楚具体的发音部位、发音方法，还有部分教师的教法不当，往往会导致留学生在习得汉语时出现语音偏误。本文着重讨论对外汉语语音教学中留学生容易出现的语音偏误及对